萝卜离体再生体系及小孢子和原生质体分离方法的研究

摘要

本研究以萝卜品种‘鲁萝卜一号’及两个萝卜自交系(W、R)为试材，对萝卜组织和器官的离体培养体系以及小孢子、原生质体的分离方法进行了研究，以探索萝卜离体培养和再生途径，为萝卜的遗传转化、体细胞杂交等生物技术育种提供依据。获得的主要结果如下:
　　 1.‘鲁萝卜一号’离体再生体系的探讨带下胚轴的茎端为不定芽诱导的最适外植体;MS+3mg/L6-BA+0.5mg/LNAA为不定芽诱导的最适培养基，MS+3mg/L6-BA+0.2mg/LNAA为不定芽继代增殖的适宜培养基，但在该种培养基上继代5次后，需适当提高6-BA浓度，才能保持较高的增殖水平。以半子叶为外植体，培养基为MS+3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA时，有利于愈伤组织的诱导;在此培养基中添加5mg/LAgNO3有利于愈伤组织的继代与保存;将愈伤组织转接在培养基MS+6mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+5mg/LAgNO3上，获得了再分化芽。
　　 2.自交系W、R离体再生体系的探讨W、R自交系都是以MS+3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA为不定芽诱导最适培养基，以MS+5mg/L6-BA+0.3mg/LNAA为不定芽继代增殖最适培养基。W、R都是以半子叶为外植体时愈伤组织的诱导效果最好;W以MS+3mg/L6-BA+0.1mg/LNAA培养基愈伤组织的诱导率较高，R以MS+3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA培养基愈伤组织的诱导率较高;W、R都是分别在各自最适的愈伤组织诱导培养基中添加5mg/LAgNO3作为继代培养基时继代效果最好。
　　 3.种子春化的萝卜茎端离体培养萌动的种子经酒精消毒1min后，于4℃下处理30天，供试的三个品种（系）均可顺利通过春化。将经春化的种子播种于培养基上，获得无菌苗后，切取茎端，利用上述所筛选的培养基配方，进行芽的诱导和继代;将获得的芽再转接于成苗培养基MS+0.2mg/LNAA上，30天后可见瓶内开花植株。
　　 4.萝卜小孢子分离方法的研究每次挤压处理20个花蕾可以获得质量好、数量适宜的游离小孢子;通过30/40/50蔗糖密度梯度离心，可以获得清晰的两条带，经检测第一条带为大部分处于单核期的小孢子层。由4℃处理2天的温室植株花蕾、温室植株花蕾、组培瓶中花蕾分离的小孢子活力前两者差异显著，后两者差异不显著。
　　 5.萝卜原生质体分离方法的研究子叶和下胚轴两种材料均在12-14h时酶解效果最好。在最佳酶解时间下，子叶的酶解产量均达到下胚轴的10倍。利用两种酶组合处理，在子叶和下胚轴两种材料上酶解对比发现，用CellulaseOnozukaR-10+MacerozymeR-10酶组合酶解的原生质体比CellulaseOnozukaR-10+PectolyaseY-23产量高，质量好。

目录

摘要

缩略词表

前言

文献综述

1．植物组织器官离体再生及小孢子、原生质体分离培养研究进展

1．1 植物组织器官离体再生研究进展

1．2 小孢子的分离、培养研究进展

1．3 原生质体分离研究进展

2 萝卜的离体培养研究进展

研究内容

1 萝卜离体再生体系研究

1．1 材料和方法

1．2 结果与分析

1．3 讨论

2 萝卜小孢子分离方法的研究

2．1 材料与方法

2．2 结果与分析

2．3 讨论

3 萝卜原生质体分离方法的研究

3．1 材料与方法

3．2 结果与分析

3．3 讨论

结论

参考文献

图版

附录

致谢

声明