人防御素-α（HD-α）克隆表达纯化及生物活性初步检测

摘要

本课题利用Gene-Bank检索得到HD-α基因序列，体外化学合成DNA碱基序列并在5’端加入羟胺裂解位点。退火、补平、酶切后连接入pBV220-IL4载体，通过与IL4融合表达来提高α-防御素基因的表达。将连接子转化大肠杆菌DH5α感受态细菌，酶切鉴定、测序正确后，获得阳性克隆。解决了天然提取α-防御素产量较低、且成本高这一问题。构建了人α-防御素基因重组表达载体，获得了稳定表达的工程菌，建立了复性与纯化技术，为其进一步的功能与应用研究打下基础。

目录

独创性声明及保护知识产权声明

资助

缩略语表

前言

文献回顾

一、机体抗感染和PMNs概述

二、防御素的分子特征

三、防御素的作用及机制

四、细菌对防御素的抵抗机制

引 言

1材料与方法

1.1.材料

1.2.方法

2.结果

2.1.HD-α基因重组体克隆、筛选鉴定

2.2.目的基因的表达

2.3.表达蛋白的纯化

2.4.蛋白活性的初步检测

3.讨论

小 结

参考文献

附 录

个人简历和研究成果

致 谢