p42/p44 MAPK信号通路对缺氧及血清刺激下RPE细胞表达HIF-1α和VEGF的影响

摘要

本文通过实验探讨了p42/p44 MAPK信号通路对缺氧及血清刺激下RPE细胞表达HIF-1α和VEGF的影响，结果表明：缺氧、血清刺激以及联合作用均可以激活p42/p44MAPK信号通路；缺氧、血清能上调RPE细胞内HIF-1α mRNA的表达，缺氧能够诱导明显的HIF-1α蛋白表达，可使HIF-1α活化，从而激活转录下游基因的表达；缺氧、血清可促进RPE细胞表达VEGF升高，且具有协同效应；缺氧和血清刺激可能通过不同的信号途径来促进VEGF的表达；缺氧刺激使RPE细胞分泌的VEGF能够刺激人脐静脉内皮细胞的增殖，p42/p44 MAPK信号通路阻断后VEGF表达量减少，人脐静脉内皮细胞增殖减弱。

目录

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资助

缩略语表

前 言

文献回顾缺氧诱导因子1介导的VEGF高表达在CNV发生中的作用

1引言

2主要材料、试剂和仪器

3研究方法

3.1 RPE细胞的培养和鉴定

3.1.1RPE细胞的原代培养

3.1.2 RPE细胞的冻存

3.1.3 RPE细胞的复苏

3.1.4 RPE细胞的鉴定

3.2缺氧和血清的影响

3.2.1免疫组化染色分析人RPE细胞磷酸化p42/p44 MAPK的表达

3.2.2 Western blot分析人RPE磷酸化p42/p44 MAPK的表达

3.2.3 RT-PCR分析人RPE细胞中HIF-1α mRNA的表达

3.2.4免疫组织化学染色分析人RPE细胞HIF-1α蛋白的表达

3.2.5 western blot分析人RPE细胞HIF-1α蛋白的表达

3.2.6免疫荧光染色法检测人RPE细胞内VEGF的表达

3.2.7 ELlSA检测人RPE细胞上清中VEGF的含量

3.2.8 MTT法检测缺氧人RPE细胞条件培养基对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

4结果

4.1 RPE细胞的生长和鉴定

4.2免疫组织化学染色分析人RPE细胞磷酸化p42/p44 MAPK的表达

4.3 Western blot分析人RPE磷酸化p42/p44 MAPK的表达

4.4 RT-PCR分析人RPE细胞中HlF-1α mRNA的表达

4.5免疫组织化学染色分析人RPE细胞HIF-1α蛋白的表达

4.6 Western blot分析人RPE细胞中HIF-1α蛋白的表达

4.7免疫荧光染色法检测人RPE细胞内VEGF的表达

4.8 ELISA检测人RPE细胞上清中VEGF的含量

4.9 MTT法检测人RPE调理液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

5讨论

小 结

参考文献

附录

个人简历和研究成果

志 谢