己烯雌酚对2，4，6-三硝基苯磺酸/乙醇诱导的大鼠结肠炎的实验研究

摘要

研究背景临床和实验研究发现，某些自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮和甲状腺炎男女发病比例分别为1∶3、1∶9、1∶19，呈现明显的性别差异；另有报道妇女在妊娠期间，血液中雌激素水平持续升高，导致机体的许多免疫功能发生改变，其中Th1细胞应答向Th2细胞应答偏移，并伴有多发性硬化、类风湿性关节炎、自身免疫性脑脊髓膜炎等Th1细胞占优势的自身免疫性疾病的病情缓解，而自身免疫性甲状腺疾病、重症肌无力等Th2细胞占优势的疾病病情加重。近年来雌激素对自身免疫性疾病的发生、发展的影响颇受注目，对其免疫调节作用及机制的探明可能为自身免疫性疾病的治疗开辟新的途经。SubramanianS等发现乙炔雌二醇可治疗小鼠关节炎，OffnerH报道雌激素及其衍生物对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓膜炎具有神经免疫保护作用。结肠炎也是一种自身免疫性疾病，男女发病比例(1.09∶1)大致相等，历来认为雌激素与结肠炎的发病并无关联。我们的实验发现TNBS/40％乙醇诱导的大鼠结肠炎雌性略重于雄性，尽管无统计学意义，但雌激素与结肠炎的关系却引起了我们的关注。 雌激素通过影响T、B等免疫细胞及神经内分泌免疫调节网络的水平影响自身免疫疾病的进程。雌激素主要通过其核受体α和β介导生物学作用，粒细胞、巨噬细胞、T细胞和B细胞等多种免疫细胞和炎症细胞表达雌激素受体；雌激素受体敲除实验发现，ER-α是胸腺和脾脏充分发育所必需的，而ER-β是雌激素介导的胸腺皮层萎缩和胸腺细胞表型转移所必需的。以上结果证明雌激素是通过直接与特定受体结合而发挥调节免疫和炎症反应的作用。业已证明，大鼠结肠表达雌激素受体，但不同状态时雌激素受体是否改变尚未见报道。本实验探讨雌激素对结肠炎的免疫调节作用及其机制，采用四个剂量的己烯雌酚，观察其对2，4，6-三硝基苯磺酸/40％乙醇诱导的大鼠结肠炎的影响，用免疫组化法检测雌激素受体在大鼠大肠不同部位和TNBS/40％乙醇诱导的大鼠结肠炎炎症部位的表达情况。 实验方法1.观察己烯雌酚对TNBS/乙醇诱导的结肠炎大鼠的影响：SD大鼠96只，雌雄各半，随机分为对照组、模型组、DES50组、DES100组、DES150组、DES200组，采用己烯雌酚(50μg·kg-1，100μg·kg-1，150μg·kg-1，200μg·kg-1)治疗TNBS/40％乙醇诱导大鼠结肠炎。肌肉注射，每天1次，共7天。给药结束后，乙醚麻醉大鼠，打开腹腔，截取8cm结肠，称重，画取溃疡面积，取病变组织10％中性甲醛固定，石蜡包埋，分离肠粘膜待测MPO活性；并取胸腺、脾脏称量。 2.雌激素受体在大鼠大肠的分布及其在结肠炎炎症部位的变化：SD大鼠32只，雌雄各半，随机分为对照组和模型组，禁食1天后，模型组大鼠2，4，6-三硝基苯磺酸/40％乙醇灌肠，对照组40％乙醇灌肠，7天后，乙醚麻醉下打开腹腔，暴露大肠，分别截取升结肠、横结肠、降结肠、直肠、结肠炎部位各0.5cm，10％中性甲醛固定，石蜡包埋，采用免疫组化染色法检测的方法检测雌激素受体在大肠不同部位和炎症部位的表达情况。 实验结果1.观察己烯雌酚对TNBS/乙醇诱导的大鼠结肠炎的影响：100μg·kg-1的己烯雌酚对结肠炎具有治疗作用，能明显降低结肠重量，减小溃疡面积，减轻粘膜水肿，降低结肠粘膜MPO活性；50μg·kg-1己烯雌酚对结肠炎无明显治疗作用，反而引起肠道粘连和腹膜炎，加重炎症；150μg·kg-1和200μg·kg-1己烯雌酚能明显改善结肠炎各项指标，但大鼠全身状态差，死亡率增高。 2.雌激素受体在大鼠大肠的分布及其在结肠炎炎症部位的变化：雌雄大鼠升结肠、横结肠、降结肠、直肠均有ER-α、ER-β分布，不同部位ER-α、ER-β表达程度相同；结肠炎时，炎症区CD4+T细胞大量浸润，ER-α在炎症区未见表达，而ER-β则呈阳性表达。 结论1.雌激素对结肠炎呈双向调节作用，适当剂量的雌激素对结肠炎具有治疗作用，小剂量的雌激素加重结肠炎炎症反应，大剂量雌激素对结肠炎虽然呈现一定治疗作用，但免疫抑制副作用明显增加。 2.ER-α、ER-β的分布及表达程度未见明显性别及结肠部位差异性。ER-β而不是ER-α可能是雌激素影响大鼠结肠炎症程度的因素之一。

目录

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缩略语表

前言

文献回顾

第一部分 己烯雌酚对TNBS/乙醇诱导的大鼠结肠炎的影响

第二部分 雌激素受体在大鼠大肠的分布及其在结肠炎炎症部位的变化

小结

参考文献

致谢