视网膜色素上皮细胞机械牵拉模型中细胞骨架的改变及MCP-1和IL-8的表达

摘要

研究背景:增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是孔源性视网膜脱离及其视网膜复位手术后的并发症，也是手术失败的主要原因。视网膜色素上皮细胞(RPE)是发生PVR病变的关键细胞。以往的研究中多关注于RPE移行增生等改变，但是在裂孔形成后的早期，RPE细胞可能受到机械牵拉力作用，其细胞的行为有何改变尚缺乏研究。 机械牵拉力可以改变细胞的细胞骨架和细胞外基质的结构，进而影响到细胞的增生、移行以及其他生物学的特性。机械牵拉力是普遍存在于生物体内的一种现象，在生理或病理状态下，视网膜色素上皮层会暴露在不同来源的力的作用，来源于玻璃体和增生膜的牵拉是常见的因素之一。在孔源性视网膜脱离形成时，色素上皮层会直接暴露，受到视网膜感觉层的牵拉和液化玻璃体的冲击，当眼球运动时，承受的拉力可能更加明显。眼内增生膜的收缩也会对色素上皮层造成牵拉。当RPE附近发生出血时，如脉络膜破裂出血或年龄相关性黄斑变性(AMD)发生的脉络膜新生血管(CNV)出血，血块的收缩和其后的瘢痕形成也可能引起对RPE的牵拉。此外，还有一些外部因素(如外伤、医源性因素)也会使RPE细胞受到力的作用。单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-8(IL-8)是参与PVR的两种重要的炎性因子，也可由RPE细胞分泌。 目的：用培养人RPE细胞黏附磁珠，附加磁场的方法制作一种机械牵拉模型，观察人RPE细胞骨架的改变以及MCP-1和IL-8的表达、合成和分泌。 方法: (1)将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE后孵育，在磁场垂直方向力作用下0h、1h、4h、8h、12h和24h，以及加入细胞松弛素D(0.05mM，25min)预处理后，用免疫荧光双标染色法着染细胞骨架中的肌动蛋白(actin)和波形蛋白(viment)。激光共聚焦显微镜下观察RPE及加入细胞松弛素D(CD)预处理后在垂直方向力作用下同样时间点的细胞骨架的变化。 (2)将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE后孵育、结合，用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光双标染色法以及酶联免疫反应(ELISA)等方法测定RPE细胞以及经细胞松弛素D处理后，在磁场垂直方向力作用下0h、15min、0.5h、1h、4h、和8h时，同时测定无磁场作用下的MCP-1和IL-8的表达、合成及分泌。 结论:机械牵拉力可以引起人RPE细胞骨架分布的改变，使其表现出肌细胞某些生物学特点；并诱导hRPE细胞表达MCP-1和IL-8，细胞松弛素D预处理后可抑制两种因子的表达。

目录

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缩略语表

前 言

文献回顾

实验部分

第一部分视网膜色素上皮细胞牵拉模型中细胞骨架的改变

第二部分培养人视网膜色素上皮细胞牵拉模型中MCP-1和IL-8的表达和分泌

小 结

参考文献

个人简历、研究生在读期间发表论文及获奖

致 谢