肝靶向氟尿苷二乙酸酯固体脂质纳米粒的实验研究

摘要

本文研究目的：合成氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)和不同聚合度的聚乙二醇十八烷基醚半乳糖苷(GnDE)，制备氟尿苷二乙酸酯固体脂质纳米粒(FUDRA-SLN)和GnDE修饰的氟尿苷二乙酸酯固体脂质纳米粒(FUDRA-GnSLN)。建立生物样品中氟尿苷(FUDR)的高效液相色谱(HPLC)检测方法；考察FUDR、FUDRA-SLN及FUDRA-GnSLN在小鼠体内的分布，探讨其肝靶向作用的区别，为寻找理想的治疗肝癌的氟尿苷新制剂奠定基础。 研究方法： 1.在吡啶和4-N'N'-二甲氨基吡啶(DMAP)的催化下，FUDR和乙酸酐作用生成氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)；不同聚合度的聚乙二醇十八烷基醚(PnSE)C18H37(OCH2CH2)nOH(n=2,10)经半乳糖苷化、脱乙酰基两步反应制备相应的半乳糖苷GnDE(n=2，10)。1HNMR鉴定FUDRA和GnDE的结构。 2.精密吸取FUDRA溶液，分别加入在37℃水浴中预热的不同pH值的磷酸盐缓冲液(PBS)、血清及肝、肾、肺匀浆稀释液中，于不同时间点取样，RP-HPLC法测定残留FUDRA浓度。 3.精密量取FUDRA的正辛醇溶液(84μg·mL-1)5.00mL，加入用正辛醇饱和过的PBS(pH6.8)5.00mL，混合5min，RP-HPLC法测定两相中FUDRA浓度，计算FUDRA分配系数。同法测定FUDR的分配系数。 4.采用薄膜超声分散法制备FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN。制备工艺：精密称取处方量物质于250mL圆底烧瓶中，加入15mL氯仿溶解。旋转蒸发除去氯仿，在烧瓶壁上形成一层薄膜。加入60mg·mL-1甘露醇水溶液10mL，水浴超声两次，0.45μm微孔滤膜过滤，分装于西林瓶中。RP-HPLC法测定载药量和包封率。通过正交设计优化处方。 5.建立测定FUDR生物样品浓度的RP-HPLC法，取0.1mL血清或脏器匀浆，加入0.5mL甲醇，漩涡混合1min，离心10min，上清液直接进样。选用KromasilC18柱(150mm×4.6mm，5μm)为分析柱，pH7.4PBS-甲醇(95∶5v/v)为流动相，流速为1mL·min-1，检测波长为268nm。 6.将FUDR-sol、FUDRA-SLN、FUDRA-G2SLN和FUDRA-G10SLN按18.6mg·kg-1(FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN按FUDR剂量折算)分别给小鼠尾静脉注射，于给药后不同时间点检测FUDR在血清、肝、肾和肺中的浓度，考察以上四种药物在小鼠体内的分布及肝靶向性。 研究结果： 1.1HNMR谱表明FUDRA和GnDE结构正确。 2.FUDRA在不同pH值PBS中水解为表观一级反应。pH值对FUDRA稳定性影响较大，FUDRA在弱酸性溶液中较稳定，在弱碱性溶液中水解较快。血清和脏器匀浆中的酶可显著加速前药的水解，在肝匀浆中水解最快。 3.FUDR与乙酸酐反应生成FUDRA后，分配系数由0.24增大到58.13，脂溶性明显提高。 4.优化的FUDRA-SLN处方为：FUDRA10mg、大豆磷脂80mg。优化的FUDRA-GnSLN处方为：FUDRA10mg、大豆磷脂80mg、GnDE4mg。FUDRA-SLN的包封率为98.27％，载药量为8.20％(n=3);FUDRA-G2SLN的包封率为95.12％，载药量为8.37％(n=3);FUDRA-G10SLN的包封率为94.36％，载药量为8.91％(n=3)。三者载药量和包封率无明显差别。FUDRA-SLN为略带淡蓝色的胶体，FUDRA-GnSLN为乳白色的胶体。电镜下可见许多圆形或椭圆形的球粒。FUDRA-SLN的粒径为215.3±83.1nm，FUDRA-G2SLN的粒径为91.3±21.2nm，FUDRA-G10SLN的粒径为106.0±37.7nm。经GnDE修饰的SLN粒径明显小于未经修饰的SLN。 5.检测FUDR在生物样品中浓度的各工作曲线线性范围为15.0～360.0μg·mL-1，最低检测浓度为3.0μg·mL-1(S/N=3)。各样品平均提取回收率＞95％，方法回收率在91～112％之间，日内日间精密度的RSD均小于10％。此方法简单、快速、灵敏，可用于小鼠体内分布研究。6.FUDR-sol、FUDRA-SLN、FUDRA-G2SLN和FUDRA-G10SLN的肝靶向效率分别为1.71、5.62、11.25和11.43。 研究结论：本研究制备了氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)，首次合成了不同聚合度的聚乙二醇十八烷基醚半乳糖苷(GnDE)，在此基础上制备了FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN；考察了FUDRA在不同pH条件下以及生物样品中的稳定性，表明FUDRA在弱酸性条件下较稳定，在血清和脏器匀浆中水解较快，在肝匀浆中水解最快；通过正交设计优化了纳米粒的处方和制备工艺，按优化处方制各的FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN有较高的载药量和包封率；建立了测定生物样品中FUDR浓度的RP-HPLC法；进行了FUDR-sol、FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN在小鼠体内的分布研究，表明制备的SLN具有良好的肝靶向性，尤以FUDRA-G10SLN靶向效率最高。

目录

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缩略语表

前 言

文献回顾

正 文

1.氟尿苷二乙酸酯和半乳糖苷的合成及鉴定

2.氟尿苷二乙酸酯稳定性和脂溶性研究

3 .FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN的制备及性质考察

4. FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN在小鼠体内的分布研究

小 结

参考文献

附 录

个人简历和研究成果

致 谢