姜黄素体外逆转人胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药性

摘要

肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时，对其他结构不同、作用靶位不同的抗肿瘤药物也产生抗药性的现象称为多药耐药(Multidrugresistance，MDR)。MDR降低了化疗药物在胃癌治疗中的效果，成为胃癌治疗中的一大障碍。为寻找有效逆转MDR的药物，中外学者进行了广泛的研究。维拉帕米(verapamil，VRP)、环胞霉素A等化学致敏剂虽有逆转MDR的功效，但因其毒副作用，使临床应用受到限制。目前国内外学者积极寻找高效、低毒、作用靶点广泛的肿瘤耐药逆转剂，许多学者把目光转向天然药物。中药资源丰富，作用靶点多，可针对多药耐药机制复杂的特点，现有研究亦提示开发中药肿瘤多药耐药逆转剂有较好的前景。 目的：观察植物提取物姜黄素在无细胞毒性作用浓度(低浓度)下，是否可逆转多药耐药胃癌细胞SGC7901/VCR对长春新碱的耐药性；如果能够逆转耐药，是否与姜黄素对耐药蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的表达和功能的影响有关。 方法：(1)借助MTT、平板克隆形成和细胞周期分析确认多药耐药胃癌细胞SGC7901/VCR相对于其亲本细胞SGC7901对化疗药的耐药性。(2)将不同浓度的姜黄素作用于SGC7901/VCR和SGC7901细胞，通过MTT实验，绘制细胞生存曲线，观察姜黄素对两种胃癌细胞生长的影响，筛选出对两种胃癌细胞均无细胞毒性作用的安全剂量的姜黄素浓度范围。 (3)将低剂量姜黄素与化疗药长春新碱联合作用于耐药细胞SGC7901/VCR，利用MTT实验等，观察姜黄素能否逆转SGC7901/VCR的耐药性，提高该细胞对长春新碱的敏感度。(4)通过碱性磷酸酶免疫组织化学、荧光免疫组织化学、间接免疫荧光流式细胞仪检测、RT-PCR和Westernblot实验，检测SGC7901和SGC7901/VCR细胞P-gp表达的差异；并观察低剂量姜黄素处理SGC7901/VCR细胞，对多药耐药基因MDR1mRNA和P-gp表达的影响。(5)利用罗丹明123(Rh123)蓄积实验，借助流式细胞仪观察姜黄素对SGC7901/VCR细胞膜表面P-gp泵功能的影响。 结果：(1)长春新碱对SGC7901细胞的生长抑制率明显高于SGC7901/VCR细胞；长春新碱对SGC7901细胞的克隆形成率的抑制明显强于SGC7901/VCR细胞；长春新碱可以使SGC7901细胞发生明显的G2/M期阻滞，而对SGC7901/VCR各时相细胞的比例没有明显的影响。 (2)在浓度筛选实验中发现，SGC7901/VCR细胞对姜黄素不产生耐药性，0-25μmol/L姜黄素对两种胃癌细胞均无细胞毒性作用。(3)低剂量姜黄素(0-25μmol/L)与长春新碱联合作用于耐药细胞SGC7901/VCR，可以使细胞生存率和克隆形成率明显降低，S期细胞(增殖期细胞)的比例明显降低，G2/M期细胞的比例升高，出现G2/M期阻滞。(4)耐药细胞SGC7901/VCR中多药耐药基因MDR1mRNA和膜表面P-gp的表达明显高于其亲本细胞SGC7901。用低剂量姜黄素处理SGC7901/VCR细胞，多药耐药基因MDR1mRNA和P-gp的表达没有明显的变化。(5)Rh123蓄积实验表明低剂量姜黄素可以直接抑制P-gp的泵功能。 结论：(1)胃腺癌细胞系SGC7901/VCR相对于其亲本细胞系SGC7901，确实对传统化疗药长春新碱产生明显的耐药性，SGC7901/VCR细胞可以认为是一株多药耐药细胞。(2)SGC7901/VCR细胞对姜黄素不具有耐受的现象。(3)低剂量姜黄素可以逆转SGC7901/VCR的耐药性，提高该细胞对长春新碱的敏感度。(4)低剂量姜黄素可能不是通过降低多药耐药基因MDR1mRNA和P-gp在SGC7901/VCR细胞的表达而实现逆转耐药的。(5)低剂量姜黄素逆转SGC7901/VCR的耐药性，可能与其直接抑制P-gp的泵功能有关。

目录

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缩略语表

摘要

前 言

文献回顾

第一部分 姜黄素对多药耐药胃癌细胞的作用

第二部分 低浓度姜黄素逆转SGC7901/VCR细胞对长春新碱的耐药性

第三部分 姜黄素逆转SGC7901/VCR细胞耐药性与耐药蛋白P-gp的关系

全文总结

参考文献

个人简历

致 谢