基于60Co诱变的灰树花新品种选育

摘要

灰树花(Grifola frondosa)又名贝叶多孔菌、栗于蘑、云蕈、莲花菌等，日本称之舞茸。隶属于真菌门(Eumycota)、担子菌亚门(Bas idiomycotina)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、多孔菌属(Polyporus)。灰树花子实体肉质柔软，脆如玉兰，味如鸡丝，口感鲜美，香味独特，且营养丰富，是一种高档珍稀食用菌;同时，灰树花还是一种十分珍贵的药用真菌，大量研究表明，从其子实体或菌丝体中提取出的灰树花多糖具有明显的抗肿瘤、降血糖、抗肝炎、抗HIV病毒，以及改善免疫系统功能等功效。灰树花因其有独特的营养和药用价值而成为新近的研究热点。 在本实验室保存的18株灰树花菌株中选择出菌丝生长速度较快、菌丝较浓密的候选出发菌株G2，G3，G6，G9，G15，用硫酸蒽酮法和硫酸苯酚两种方法测定5株菌株菌丝多糖含量，硫酸蒽酮法测得这5株菌株多糖分别为21.57mg/g，16.07mg/g，20.61mg/g，16.68mg/g，12.93mg/g;硫酸苯酚法测得这5株菌株多糖分别为17.37mg/g，14.55mg/g，16.90mg/g，15.01mg/g，11.24mg/g;选择出一株生长速度较快及多糖含量高的出发菌株G2，进行60Co照射。 经过初步的筛选，共筛选出984株单菌落，筛选出的单菌落与出发菌株G2做拮抗实验，共筛选出5株突变菌株为G-18、G-124、G-206、G-588、G-712。 根据ERIC-PCR技术对灰树花5个突变菌株和出发菌株G2进行亲缘关系分析，表明筛选出的5个突变菌株都与出发菌株G2发生遗传改变，且这5个突变菌株均为不同的突变菌株，根据苯酚硫酸法测多糖，这5株突变菌株多糖含量分别为18.20mg/g，19.10mg/g，19.80mg/g，18.97mg/g，18.94mg/g;出发菌株G2多糖含量为18.89mg/g。，G-206多糖含量比G2高出6.5％，可以确定6-206为筛选出的新菌株。 将G-206与G2分别进行栽培试验，G-206每袋鲜重达到231.3g，生物转化率达到77.1％，G2每袋鲜重达到194.4g，生物转化率达到64.8％; G-206每袋鲜重比G2高36.9g，生物转化率提高12.3％。

目录

声明

摘要

前言

1 糖生物学的提出

2 真菌多糖

2．1 真菌多糖概述

2．2 真菌多糖的主要药理作用

3 灰树花研究现状

3．1 灰树花概述

3．2 营养价值

3．3．药用价值

3．4 开发与利用

3．5 国内外研究现状与分析

4 食用菌育种方法研究进展

4．1 野生食用菌驯化育种

4．2 孢子分离育种

4．3 食用菌杂交育种

4．4 食用菌诱变育种

4．5 原生质体融合育种

4．6 基因工程育种

4．7 菌种脱毒技术

5 种质鉴定技术

5．1 PARD标记

5．2 RFLP标记

5．3 ERIC-PCR技术

5．4 拮抗反映

7 研究的主要内容

8 技术路线

第一章 灰树花出发菌株筛选实验

1 材料与方法

1．1 材料、试剂与仪器

1．2 方法

1．3 菌丝多糖测定

2 结果

2．1 平板菌丝生长速度测定

2．2 菌丝多糖含量

3 小结

第二章 灰树花诱变

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 培养基

1．3 实验仪器

1．4 菌丝培养

1．5 60Co辐射诱变

1．6 诱变子筛选 单菌落筛选

1．7 变异菌株初筛

2 结果与分析

3 小结

第三章 诱变菌株鉴定

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 培养基

1．3 试剂

1．4 仪器

1．5 拮抗实验

1．6 菌丝生长速度测定

1．7 多糖测定

1．8 ERIC-PCR

2 结果与分析

2．1 拮抗实验

2．2 菌丝生长速度测定

2．3 多糖测定结果

2．4 DNA图谱

2．5 ERIC-PCR电泳结果

2．6 分析基因指纹图谱

3 小结

第四章 灰树花栽培实验

1 材料与方法

1．1 供试菌株

1．2 灰树花一级种的制备

1．3 灰树花二级种的制备

1．4 制袋及菌丝培养

1．5 出菇管理

2 结果与分析

2．1 菌丝显微比较

2．2 生物转化率

第五章 展望

参考文献

附图

致谢

硕士期间论文发表情况