兔坐骨神经电损伤后背根神经节钠钾离子通道表达变化的研究

摘要

背景：近年来电损伤病人有增多的趋势,目前已占烧伤病人总数的8％,截肢率高达64.5％。在电损伤病例中周围神经是损伤修复与重建周期最长,恢复最困难的组织,周围神经电损伤后的修复成为现代电损伤研究的方向。电压依赖性离子通道是神经元和其他可兴奋细胞赖以产生可传导电信号的结构基础，在神经系统内控制着信号传导许多方面，这些通道结构上细微的改变均会影响神经功能的正常。神经电损伤时，势必将引起相应背根神经节（DRG）细胞膜上大分子蛋白的构像改变。本课题计划以DRG离子通道为切入点，研究在周围神经电损伤后DRG离子通道表达水平变化，通过研究电损伤后DRG细胞膜上大分子蛋白的作用，尤其是离子通道在神经电损伤后的溃变和再生过程中的分布和结构的改变以及这些变化对神经功能改变的影响，从分子水平反映神经的损伤程度和离子通道的变化情况，掌握电损伤后离子通道损伤与神经功能异常之间的规律。
　　实验一，兔坐骨神经实验性电损伤后背根神经节神经元细胞离子通道SCN9A，Kv1.5多克隆抗体的免疫组化观察
　　目的：通过免疫组化方法研究兔坐骨神经电损伤后背根神经节神经元细胞离子通道SCN9A，Kv1.5的表达变化。
　　方法：本研究采用100只健康成年中国家兔分为阴性对照组、50V、110V和220V4个电损伤组，取标本时间分为立即组、4周组，用免疫组织化学方法半定量分析DRG上钠钾离子通道SCN9A，Kv1.5的表达变化。
　　结果：电损伤后立即与4周后背根神经节（DRG）上离子通道的的表达降低，且与电压呈负相关，220V4周时无明显恢复。
　　结论：离子通道在神经电损伤后的溃变程度和再生恢复取决于电压和时间。电损伤后，SCN9A表达下降可能导致是感觉麻木、缺失的原因；KV1.5表达下降可能是导致细胞凋亡的原因。
　　实验二，家兔坐骨神经不同电压电损伤后背根神经节内电压依赖性钾钠离子通道mRNA表达水平变化研究
　　目的：了解不同电压电击前后电压依赖性钾离子通道和电压依赖性钠离子通道在背根神经节的表达。
　　方法：随机将家兔分成5组：对照组，50V、100V、150V和200V电击组，每组3只，电击家兔坐骨神经。一周后，取腰椎4-6区段背根神经节，应用RT-PCR方法检测其中Kv1.2α,Kv1.4α,Kv1.5，Kv11.1和Nav1.1β，Nav1.7α型通道mRNA表达量的变化。
　　结果：电击组Kv1.2α，Kv1.4α，Kv1.5α和Nav1.1β，Nav1.7α的mRNA表达量下降，Kv总和Nav总均有所下降，Kv11.1α水平提高；而且随着电击电压的增高，表达水平下变化更显著。
　　结论：Kv和Nav参与了背根神经节对周围传入信息的传递和调制，周围神经电损伤后，相应背根神经节内电压依赖性钾钠离子通道表达水平的变化可能是电损伤发生的分子机制。

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文献回顾

1．电损伤的相关研究

2 DRG 离子通道在周围神经神经损伤后的研究现状

正 文

实验一 兔坐骨神经电损伤后 DRG 神经元细胞离子通道SCN9A，Kv1.5 多克隆抗体的免疫组化观察

1 实验材料

2 实验方法

3、结果

4.讨论

实验二 兔坐骨神经电损伤后 DRG 内钠钾离子通道表达变化的 RT-PCR 方法观察

1 实验材料

2 实验方法

3 结果

4 讨论

小 结

参考文献

致谢