猪圆环病毒2型(PCV2)SN07-12株灭活疫苗的研究

摘要

2007年12月，上海市农业科学院畜牧兽医研究所从苏南地区一发病猪场采集病料，分离到一株PCV2病毒，命名为SN07-12株，在此基础上进行了全病毒灭活苗的研制，论文主要内容如下:
　　 1.猪圆环病毒2型(PCV2)SN07-12株的优化培养。本试验通过调整PK15细胞浓度，优化收毒时间等方法，在连续传代的过程中获得较高滴度的SN07-12株病毒培养物。并通过试验表明，收获液上清中含有较高效价的病毒量，调节PCV2吸附阶段、培养阶段的培养基血清含量，血清含量由常规工艺的8％降为2％,利用新工艺生产的3批病毒效价与传统工艺相当，说明新工艺批次差异小，可以作为PCV2的生产工艺。
　　 2.聚合酶链式反应(PCR)和间接免疫荧光法(IFA)测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量(TCID50)的比较。初步比较两种方法测定病毒滴度的差异，并采用荧光定量PCR（Real-time PCR）法对试验结果进行验证。结果表明IFA法比PCR法敏感准确，更适宜用于测定PCV2的效价。
　　 3.不同灭活方法对猪圆环病毒2型SN07-12株灭活效果的研究。采用终浓度为0.1％和0.2％的二乙烯亚胺(BEI)、0.1％和0.2％的甲醛对PCV2灭活，不同时间点取样，IFA检测病毒灭活效果。结果显示，蛋白质印迹试验中，BEI灭活组PCV2抗原蛋白阳性信号明显强于甲醛灭活组。首次证明，BEI对PCV2表面蛋白破坏小，能够更好的保留其抗原性，而且对灭活时间做了充分明确的研究，为新型PCV2疫苗的研制奠定基础。
　　 4.猪圆环病毒2型(PCV2) SN07-12株感染BALB/c小鼠的研究。本试验结果发现，PCV2-SH株可以感染BALB/c小鼠，为利用无PCV2感染的BALB/c小鼠来研究PCV2的致病机理和为今后建立合适的动物发病模型提供理论参考。
　　 5.猪圆环病毒2型(PCV2)SN07-12株全病毒灭活苗的研制及其免疫效力的研究。使用0.1％BEI灭活2％血清培养的病毒液32h，IFA检测完全灭活，与ISA206佐剂乳化成油包水型的油佐剂灭活苗。通过免疫保护试验发现，免疫组猪能持续检测到较高水平的PCV2抗体，能够明显缩短病毒血症的存在时间，减少猪排毒，明显减轻脾脏和淋巴结的微观病理变化。
　　 综合上述，本研究所制备的PCV2灭活疫苗可以对仔猪起到良好的保护作用，为灭活疫苗研究奠定了重要基础。

目录

声明

摘要

文献综述

试验一 猪圆环病毒2型(PCV2)SN07-12株的优化培养

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

试验二 PCR和IFA测定猪圆环病毒2型半数细胞培养感染量(TCID50)的比较

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

试验三 不同灭活方法对猪圆环病毒2型SN07-12株灭活效果的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

试验四 猪圆环病毒2型(PCV2)SN07-12株感染BALB／c小鼠的研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

试验五 猪圆环病毒2型(PCV2)SN07-12株全病毒灭活苗的研制及其免疫效力研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

符号和缩略词说明

致谢

硕士期间发表的文章