13/17罗伯逊易位猪染色体瑞粒的研究

摘要

端粒是存在于线状染色体末端的DNA重复序列，它是线状染色体末端的一种特殊结构，由富含GC碱基的DNA简单重复序列及端粒结合蛋白共同构成。端粒具有维持染色体末端结构稳定，防止染色体间末端连接，并且可补偿滞后链5'末端在消除RNA引物后所造成的空缺的生物学功能。端粒DNA在染色体上的组成及变化一直都是生物研究的一个重要方面，对13/17罗伯逊易位染色体端粒的研究可以为研究罗伯逊易位的相关遗传机理提供研究资料。
　　 本研究采用HaeⅢ和HinfI内切酶对提取的猪组织基因组DNA样进行双酶切，将酶切产物进行回收连接，根据已知的端粒简单重复序列(TTAGGG)n，通过Primer5.0设计出三条引物，以连接产物为模板进行两次PCR，纯化回收PCR产物，将其连接到pMD18-T载体上，挑取阳性克隆进行测序。将得到的端粒简单重复序列作为探针，采用地高辛随机引物标记法标记探针，对13/17罗伯逊易位猪的染色体标本片进行荧光原位杂交，以检测罗伯逊易位染色体新着丝粒区域是否存在端粒简单重复序列。阳性克隆子的测序结果显示，95～341bp为端粒简单重复序列，因此采用此246bp序列作为荧光原位杂交的探针。荧光原位杂交的检测结果显示，在染色体的两端显示杂交信号，但在13/17罗伯逊易位染色体着丝粒区域不显示杂交信号，说明在13/17罗伯逊易位染色体着丝粒部位发生了端粒序列的缺失。
　　 定位出13/17罗伯逊易位新染色体融合部位发生了端粒序列的缺失，可为进一步研究端粒序列的缺失对13/17罗伯逊易位猪的生产性能产生的影响提供参考，从而为深入研究罗伯逊易位的分子机理提供研究材料。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

1 端粒的研究进展

1．1 端粒的发现

1．2 端粒的基本结构

1．3 端粒的生物学功能

2 罗伯逊易位的研究进展

2．1 罗伯逊易位

2．2 罗伯逊易位的现状和内容

2．3 罗伯逊易位研究的技术方法

3 荧光原位杂交技术研究进展

3．1 荧光原位杂交技术

3．2 荧光原位杂交技术的基本原理

3．3 荧光原位杂交技术在不同领域的应用

第二章 端粒简单重复序列的克隆

1 试验材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

2 方法

2．1 主要试剂的配制

2．2 猪组织基因组DNA的提取

2．3 基因组DNA双酶切

2．4 回收DNA片段的处理

2．5 引物的设计与合成

2．6 PCR扩增

2．7 基因片段的回收、纯化及测序

2．8 目的片段连接到载体

2．9 大肠杆菌DH5α感受态的制备

2．10 重组质粒的转化及阳性克隆的筛选

2．11 重组质粒的PCR扩增鉴定

3 结果与分析

3．1 基因组DNA双酶切结果

3．2 PCR结果

3．3 质粒的PCR鉴定结果

3．4 测序结果

3．5 序列分析

4 讨论

第三章 13／17罗伯逊易位染色体端粒DNA的FISH检测

1 试验材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

2 方法

2．1 主要试剂的配制

2．2 染色体标本的制备

2．3 探针的标记

2．4 探针的标记效率检测

2．5 荧光原位杂交

2．6 杂交后的观察

3 结果与分析

3．1 地高辛标记检测结果

3．2 荧光原位杂交结果

4 讨论

4．1 影响荧光原位杂交的因素

4．2 端粒DNA的FISH检测在罗伯逊易位中的意义

结论

参考文献

英文缩写词表

导师组意见

致谢

攻读硕士期间发表文章