原发性肝癌染色体8p和16q杂合性丢失的研究

摘要

背景
　　原发性肝癌是全世界范围内最常见恶性肿瘤之一。最近的流行病学研究表明，全球每年约有62万新增病例，而且随着全球化进一步加剧，过去25年不仅在发展中国家，在一些西发达国家其发病率及死亡率也呈逐年上升之势。但其发生、发展及转移的内在分子机理作用仍未很好阐明，一直是肿瘤研究领域热点问题。目前，肿瘤分子遗传学研究表明癌发生涉及多个因素参与，其中遗传基因的变异是肿瘤发生关键因素，而癌基因的激活和（或）抑癌基因的的失活起了相当关键作用，抑癌基因作用机制的研究越来越受到重视。最近多研究中心发现在HCC组织中有染色体1p，1q，4q，6q，8p，10q，13q，14q，16q，17p和22q等区域存在杂合性高频丢失，而染色体特定部位发生杂合性丢失（LOH）等遗传变异引起抑癌基因的失活。由于染色体的微卫星位点存在地理区域性差异，筛选出的染色体片段仍有待进一步精确，染色体遗传变异在HCC发生发展过程中的作用仍需深入探讨。
　　目的
　　通过对SNP6.0芯片筛选出的染色体8和16的部分基因及染色体片段上具有8个有高度多态性的微卫星位点杂合性丢失（LOH）状态研究，分析HCC上特定微卫星位点的LOH发生频率与HCC发生发展关系及其与临床病理特点之间的关系，以期初步筛选HCC相关的抑癌基因，为HCC的早期诊断、分子分型及预后预警提供可能的新分子标记物。
　　方法
　　1、收集肝细胞肝癌组织及癌旁对照组织病理标本45例，标本均有病理学检查，并经两位资深病理学专家确诊。
　　2、选取SNP6.0基因芯片筛选出的染色体高频异常部位的8个微卫星多态性位点，分别是：D8S261、D8S499、D8S1125、D8S1810、D8S1827、D16S402、D16S422、D16S511。依据GenBank数据库设计微卫星位点引物。
　　3、采用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶-银染法分析各标本组织具有高度多态性微卫星位点杂合性丢失（LOH）的状态。并通过卡方检验或Fisher’s确切概率检验进行数据统计，探讨其与临床病理特征之间的关系。
　　结果
　　1、LOH检测频率45例HCC组织的8个微卫星位点的LOH检出频率分别是:D8S261（39.02％，16/41）、D8S499（34.88％，15/43）、D8S1125（15.38％，4/26）、D8S1810（19.51％，8/41）、D8S1827（9.76％，4/41）、D16S402（19.04％，8/42）、D16S422（21.21％，7/33）、D16S511（53.33％，24/45）。其中在D16S511位点发生LOH频率最高，为53.33％（24/45），依次是D8S261（39.02％，16/41）和D8S499（34.88％，15/43）位点。所有HCC组织中发现至少一个位点发生LOH的总频率为68.89％（31/45），其中未见在所有位点都出现LOH的病例。
　　2、LOH与HCC的临床病理特征的关系对肿瘤组织染色体8p、16q片段的8个高度多态性DNA微卫星位点进行杂合性丢失（LOH）频率分析发现：在病史、HBsAg感染、血清AFP、肿瘤大小、分化程度、伴有肝硬化、肝内转移等临床病理指标中的总LOH分布频率无统计学差异；但个别位点存在差异。在D8S261位点，HBsAg阳性感染患者LOH分布高于阴性者（P＜0.028）；在D8S1810位点，伴有肝硬化者的LOH分布高于无肝硬化者（P＜0.045）；在D16S511和D8S499位点，EdmondsonⅢ-Ⅳ级以上患者的LOH分布高于Ⅰ-Ⅱ级（分别为P＜0.003，P＜0.033）。
　　结论
　　1、本实验发现在D16S511、D8S261和D8S499位点上发生LOH频率较高，提示在染色体16q23、8p12与8p22-21.3区域可能存在与HCC发生发展相关的潜在抑癌基因，为下一步筛选新的抑癌基因提供了一定的新线索。
　　2、特定位点的遗传变异LOH发生可能与HBsAg阳性感染、肝硬化及病理分级等临床指标相关，指导临床早期诊疗、分子分型及预后预警提供了新的理论依据。
　　3、对HCC的某些染色体片段及部分基因区域可能存在的潜在的抑癌基因的初探，为下一步对相关抑癌基因图谱进行精确定位，克隆出HCC相关抑癌基因并对其分子信号通路、传导等机制方面进行深入研究提供了一定的理论依据。

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文献回顾

1 HCC 的流行病学

2 HCC 的病因

3 HCC 的遗传学

4 杂合性丢失与癌

5 杂合性丢失(LOH)技术的优势与局限性

正文

原发性肝癌染色体 8p 和 16q 杂合性丢失的研究

0 引言

1 材 料

2 方 法

3 结 果

4 讨 论

小 结

参考文献

附 录

个人简历和研究成果

致谢