双酶法制取花生抗氧化肽中试研究

摘要

本研究以花生蛋白粉为原料，经碱溶酸沉后制得花生分离蛋白。采用碱性蛋白酶（Alcalase）和风味蛋白酶（Flavourzyme）分步水解花生分离蛋白制取花生抗氧化活性肽。本文对双酶法制取花生抗氧化活性肽中试生产的工艺流程及操作要点进行了研究，并进行了原料成本分析，测定其水解度及肽得率;测定了花生抗氧化活性肽的抗氧化能力;并对花生抗氧化活性肽进行分离纯化，分析其氨基酸组成及序列，构建了花生抗氧化活性肽的构效关系。主要结论如下: 1.研究了以花生蛋白粉为原料，采用双酶法制取花生抗氧化活性肽中试生产的工艺流程及操作要点，测得中试生产的水解度为18.05％，肽得率为17.50％。为双酶法制取花生抗氧化活性肽产业化生产提供了依据。 2.双酶法制取花生抗氧化肽原料成本经过计算约为229.5元/kg花生抗氧化肽，得出双酶法制取花生抗氧化活性肽产业化生产切实可行。 3.花生抗氧化活性肽对羟基自由基(·OH)的清除能力为46％(6mg/ml);对超氧阴离子(O2-)的清除能力为47.45％(3mg/ml);对DPPH·的清除作用当其浓度达到1.80mg/ml时，与谷胱甘肽相当（95％左右）;亚油酸体系自动氧化144h时，加入花生抗氧化肽(2mg/ml)的亚油酸体系的吸光度为0.82，低于未加入抗氧化剂的空白对照组的吸光度(1.63)，表明花生抗氧化肽具有一定的抗亚油酸自动氧化能力;花生抗氧化肽具有一定的还原能力，当肽浓度为lmg/ml时，加入花生抗氧化肽的体系的吸光度为0.32＞0。花生抗氧化肽抗氧化能力均随着浓度的升高而增强。 4.双酶法制取的花生抗氧化肽先经过3kDa超滤膜超滤后，再经SephadexG-15分离，然后PHPLC分离制备后，将活性较强的部分进行UHR-Q-TOF分析得出其有效的短肽序列为Thr-Pro-Ala和Ile/Leu-Pro-Ser和Ser-Pro。 5.花生抗氧化肽含有疏水性氨基酸Pro，Ile/Leu，以及非极性的脂肪族氨基酸Ala，均属于具有较强抗氧化能力的氨基酸，Pro可以直接提供质子，易于捕获自由基，而Thr和Ser可与其他氨基酸的相互作用，起到增强其所在肽链的抗氧化活性的功效。

目录

声明

摘要

缩略词和符号

1 前言

1．1 花生概况

1．2 花生的组成

1．2．1 脂肪

1．2．2 蛋白质

1．2．3 碳水化合物及其他成分

1．3 花生蛋白的营养价值

1．4 花生蛋白的利用现状

1．5 生物活性肽

1．5．1 生物活性肽的作用机理及活性

1．5．2 生物活性肽的制备方法

1．5．3 生物活性肽的分类

1．6 抗氧化肽的抗氧化机理及抗氧化活性

1．7 抗氧化肽的国内外研究进展

1．8 抗氧化活性肽的发展趋势

1．9 研究意义、目的及主要内容

2 双酶法制取花生抗氧化活性肽中试研究

2．1 引言

2．2 实验材料、试剂及仪器

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 花生蛋白粉及花生分离蛋白蛋白含量的测定

2．3．2 水解度的测定

2．3．3 花生抗氧化活性肽得率的测定

2．4 结果与讨论

2．4．1 花生抗氧化活性肽中试工艺流程

2．4．2 花生蛋白粉及所得分离蛋白的蛋白质含量

2．4．3 双酶法制取花生抗氧化活性肽的水解度及得率

2．4．4 双酶法制取花生抗氧化活性肽中试原料成本分析

2．5 本章结论

3 花生抗氧化肽抗氧化活性的研究

3．1 引言

3．2 实验材料、试剂及仪器

3．2．1 实验材料

3．2．2 实验设备

3．3 实验方法

3．3．1 清除羟基自由基能力的测定

3．3．2 清除DPPH·自由基的能力

3．3．3 清除超氧阴离子(O2-)能力的测定

3．3．4 在亚油酸体系中的抗氧化能力测定

3．3．5 还原能力的测定

3．4 结果与讨论

3．4．1 花生抗氧化活性肽对羟基(·OH)自由基的清除能力

3．4．2 花生抗氧化活性肽对DPPH·的清除能力

3．4．3 花生抗氧化活性肽对O2-的清除能力

3．4．4 花生抗氧化活性肽在亚油酸体系中的抗氧化能力

3．4．5 花生抗氧化活性肽的还原能力

3．5 本章结论

4 花生抗氧化肽的分离纯化及构效关系

4．1 引言

4．2 实验材料、试剂及仪器

4．2．1 实验材料

4．2．2 实验设备

4．3 实验方法

4．3．1 花生肽的超滤

4．3．2 还原能力的测定

4．3．3 凝胶过滤层析分离花生肽

4．3．4 制备型高效液相分离制备花生抗氧化肽

4．3．5 UHR-Q-TOF分析花生抗氧化肽氨基酸组成及序列

4．4 结果与讨论

4．4．1 超滤后花生抗氧化肽各部分还原能力

4．4．2 Sephadex G-15分离C2

4．4．3 制备型高效液相色谱分离制备花生抗氧化肽的分析

4．4．4 花生抗氧化肽的质谱分析及构效关系

4．5 本章结论

5 主要结论

参考文献

致谢

作者简历