13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系的建立及鉴定

摘要

为了加强对13/17罗伯逊易位猪这一种质资源的保护和进一步研究，本文以初生13/17罗伯逊易位杂合子猪、纯合子猪及正常核型家猪耳部皮肤组织为材料，应用组织块分离培养法构建了3种核型家猪的成纤维细胞系，冷冻保存细胞60支。试验对所分离的成纤维细胞进行了形态观察、生长动力学、染色体核型分析、绿色荧光蛋白报告质粒转染以及微生物污染检测等方面的生物学特性研究。
　　结果表明：倒置相差显微镜下3种核型家猪细胞形态呈梭形且长势良好，为标准成纤维细胞形态。冻存细胞复苏之后活力分别为94.0％(杂合子猪)、93.3%(纯合子猪)、92.8%(正常核型家猪)，说明间歇降温冻存法效果良好。免疫组化结果表明细胞内波形蛋白呈现阳性表达。细胞生长曲线呈“S”型，细胞经历了生长缓慢期，生长对数期以及生长平台期三个阶段。细胞核型分析显示杂合子猪细胞染色体2n=37所占比例为92.5%，纯合子猪细胞染色体2n=36所占比例为93.8%，正常核型家猪细胞染色体2n=38所占比例为96.3%。质粒转染结果表明外源质粒能够稳定地在细胞中进行表达。细菌、真菌、病毒、支原体检测结果均为阴性。表明本研究已成功建立13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系。

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前言

第一章 文献综述

1 罗伯逊易位简介

1.1罗伯逊易位研究新技术

1.2罗伯逊易位的影响

1.3 罗伯逊易位的前景

2 动物细胞培养简介

2.1动物细胞体外培养技术简介

2.2培养细胞的生物学概述

3成纤维细胞体外培养

4细胞系的具体应用

4.1生命科学研究方面应用

4.2医学方面的应用

4.3生物制品的生产

第二章 13/17罗伯逊易位猪成纤维细胞系的建立及鉴定

1 试验材料

1.1试验动物

1.2主要仪器

1.3 主要试剂

2试验方法

2.1 细胞原代培养

2.2 传代培养

2.3 细胞纯化

2.4 细胞冻存及复苏

2.5 成纤维细胞鉴定

2.6 生长曲线绘制

2.7 染色体核型分析

2.8 脂质体转染试验

2.9 微生物污染检测

3 结果与分析

3.1 细胞原代培养形态观察

3.2 传代培养后细胞生长情况

3.3 细胞冻存、复苏及活力检测

3.4 成纤维细胞的鉴定

3.5 生长曲线绘制

3.6 染色体核型分析

3.7 脂质体转染

3.8 微生物污染检测

4.讨论

4.1原代培养材料的选取

4.2细胞的体外培养和生长特性

4.3细胞的传代培养

4.4细胞的冻存和复苏

4.5免疫组化实验分析

4.6培养细胞的生长曲线

4.7核型分析

4.8荧光蛋白报告质粒转染分析

4.9 污染检测

结论

参考文献

导师组意见

致谢

攻读硕士期间科研学术成果