山东部分地区肉鸡屠宰加工生产链沙门氏菌污染状况调查和耐药性分析

摘要

通过对山东地区肉鸡屠宰加工生产链各环节中的沙门氏菌进行调查，了解山东省不同地区屠宰生产链中各环节沙门氏菌的污染水平、血清型分布，耐药性情况以及毒力基因的携带情况。结合ERIC-PCR分型方法对生产链中的沙门氏菌进行分子研究，比较不同地区菌株间的亲缘关系，为菌株的流行病学研究提供技术基础。
　　本研究采集山东省6个地区7个大中型屠宰场不同屠宰环节中的995份样品，利用常规检测方法和PCR对菌株进行分离鉴定，xMAP液相芯片法鉴定血清型。在995份样品中共分离出233株沙门氏菌，总分离率为23.41％，不同地区沙门氏菌的分离率不同，其中A地区的分离率最低为14.98%，B地区的分离率最高为67.50%；在肉鸡不同屠宰环节中沙门氏菌的的分离率不同，其中烫洗机和褪毛机中沙门氏菌分离率最高，达48%，预冷后的胴体表面的分离率最低，为7.69%；共得到25种不同的血清型，其中有四种为优势血清型，分别是：肠炎沙门氏菌，印第安纳沙门氏菌，汤普逊沙门氏菌，德尔卑沙门氏菌。
　　利用聚合酶链式反应(PCR)扩增整合酶基因 int l检测沙门氏茵中 I类整合子携带率及可变区耐药基因盒,并对从β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和酰胺醇类5类抗生素的15种耐药基因进行检测，微量肉汤稀释法（MIC法）测定菌株对8类13种抗菌药的敏感程度。233株沙门氏菌对13种药物耐药程度明显不同，其中对GM耐药程度最高，为100%，其次为DOX，耐药率为84.94%；2株菌表现对实验中所有抗生素的全抗性，未出现全敏感性菌株。223株(95％)至少可耐2种抗生素，共产生了57种耐药谱，耐药谱型复杂，主导耐药菌谱是 GM-DOX、GM-SPT-DOX-AM、ENR-TE-GM-SPT-DOX-EFT-FFC-SF-SXT-AM。69%的沙门氏菌检测出第 I类整合子。PCR扩增I类整合子耐药基因盒，检测率为73%，扩增产物大小为1009 bp和1664bp，携带 aadA5、dfrl7和aadA2耐药基因，可分别介导对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶的耐药。
　　检测位于菌株毒力岛（SPI）和毒力质粒（spv）等共15对毒力基因的携带情况。沙门氏菌的毒力岛基因sptP，sseL，mgtC，siiE，sopB的携带率是100%，毒力基因spvA、spvB、spvC、spvD、spvR、iacp，avra，prgk、fima和stn的检出率分别是60%、34%、49%、51%、63%、99%，38%、99%、99%和99%。
　　利用ERIC-PCR对菌株进行分型并利用NTSYS-pc2.1绘制聚类分析图。来自不同屠宰环节的68株沙门氏菌按80%的同源性可以分为3个聚类簇（I～III）。选择山东省不同地区的主要血清型的沙门氏菌共26株菌，按90%的同源性可以分为9个基因型（I～IX）。来自山东省不同地区的17株肠炎沙门氏菌按90%的同源性可以分为7个基因型（I～VII）。I类为主要基因型，共有7株沙门氏菌，包括6个地区的沙门氏菌。剩余6个的基因型均为A地区分离到的沙门氏菌。
　　山东地区肉鸡屠宰加工生产链中沙门氏菌污染状况较为严重，肠炎沙门氏菌、汤卜逊沙门氏菌与印地安纳沙门氏菌为优势血清型。菌株耐药情况比较严重，对庆大霉素耐药最明显，产生了多种耐药谱，耐药表型与耐药基因型基本一致。毒力基因的检出率较高，山东地区分离的沙门氏菌的可能具有较强的致病性。分子分型结果表明不同屠宰环节之间存在着严重的交叉污染，不同地区主要血清型之间存在相同的基因型，获得的分子信息可以为菌株的追踪溯源提供依据。

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文献综述

1 沙门氏菌概述

2 沙门氏菌的危害

3 沙门氏菌的耐药情况

4 沙门氏菌毒力因子的研究

5 肠杆菌科基因间保守重复序列与ERIC-PCR

第一章 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的分离和血清型鉴定

1 材料

2 方法

3.结果

4.讨论

5.小结

第二章 肉鸡屠宰生产链中沙门氏菌耐药基因检测与耐药相关性分析

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5小结

第三章 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌毒力基因筛查及ERIC-PCR分型

1 材料

2 方法

3 结果

4.讨论

5 小结

结论

参考文献

附录

致谢