重组人TNF-α免疫小鼠全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建

摘要

目的:应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)的单链抗体库.为研究人rTNF-α受体结合位点,了解结构与功能的关系奠定基础,同时也为临床免疫治疗提供一种经济有效的新型抗体打下基础.结论:该课题从提取免疫小鼠脾脏淋巴细胞的总RNA出发,运用RT-PCR、重叠延伸反应以及DNA重组技术等,获得了抗rhTNF-α抗体的可变区VH、VL基因,成功地构建了全套抗rhTNF-αScFv噬菌体表面展示文库.该文库为利用亲和富集筛选技术,获得具有TNF-α结合活性的完整重组噬菌粒克隆奠定了基础.同时也为进一步的基因工程抗体研究及抗原—抗体相互作用机理的阐明打下基础.

目录

前言

一、免疫动物

材料

方法

结果

讨论

二、全套VH、VL基因片段的扩增和鉴定

材料

方法

结果

讨论

三、全套ScFv基因的拼接和PCR扩增

材料

方法

结果

讨论

四、全套ScFv基因的克隆和文库构建

材料

方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述

参考文献

致谢