人抗地高辛单链抗体（ADAscFv）的纯化

摘要

目的 刘德新等人已通过噬菌体抗体库技术绕过免疫成功克隆了人抗地高辛单链抗体(human single-chain variable fragment of anti-Dig antibody,ADAscFv),并使其在大肠杆菌中得到可溶性表达,目前需依据抗体性质的特点进行分离与纯化.由于不同蛋白质的纯化无通用策略,给制备带来了较大难度和特殊性,该实验的目的即通过试用不同的纯化方法(盐析、阴离子交换、凝胶过滤等),探明适合纯化ADAscFv的最佳纯化方法及条件,为下一步制备诊断Dig中毒的试剂盒和探明ADAscFv对Dig中毒的拮抗作用等后续研究提供实验室依据.结论 含分泌型ADAscFv的大肠杆菌培养上清经0-50％饱和度硫酸铵盐析粗分离后,在FPLC系统建立阴离子交换层析,选用HiTrap Q HP型强阴离子交换层析柱(1cm×5cm),使用盐离子为NaCl的pH9.00.05 mol/L Tris-HCl溶液阶梯洗脱纯化,于第二峰收集洗脱样品,可获得具有生物活性及高纯度的ADAscFv,该方法操作容易,重现性好,选择性高,所需费用相对低廉,纯化周期短,为快速高效地制备适于临床应用的ADAscFv提供了实验室依据.

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文摘

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前言

实验材料

实验方法与结果、讨论

第一部分ADASCFV在E.COLI中的可溶性表达

第二部分盐析法初步分离制备ADASCFV

第三部分阴离子交换层析纯化制备ADASCFV

第四部分阴离子交换FPLC纯化制备ADASCFV

第五部分凝胶过滤层析纯化制备ADASCFV

结论

参考文献

综述

参考文献

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致 谢