三甲基氯化锡抑制肾氢钾ATP酶活性的研究

摘要

目的:研究三甲基氯化锡(Trimethyltin Chloride，TMT)对肾氢钾ATP酶(H<'+>-K<'+>+ATPase,HKA)活性的抑制作用，阐明TMT中毒致低钾血症的确切机制。 方法: (1)断头处死大鼠，取。肾，制备肾组织匀浆(10％)。按酶活性测定试剂盒的方法，观察肾组织匀浆浓度，反应时间，哇巴因及sch28080对酶活性的影响，确定最佳实验条件。在反应体系中，加入0，5，25，125和625μM的TMT，测定肾HKA的活性，用肾脏HKA酶特异抑制剂Sch-28080作为质控。 (2)取SD大鼠24只，随机分为4组，分别腹腔注射TMT 0、10、21.5、46.4mg/kg 1小时后经心脏采集动脉血进行血气分析；其后断头处死动物，取血浆测定K<'+>、Na<'+>、Cl<'->、GLU、CK、CK-MB、LDH、HBDH、AST、AKT；取一侧肾脏测定HK和钠钾ATP酶(NKA)；另一侧肾脏进行HKA免疫荧光原位观察和组织病理学观察。 (3)取SD大鼠36只，随机分为6个组，其中3个实验组，分别经腹腔注射TMT(10 mg/kg)，另3组为对照组，分别给予生理盐水(10ml/kg)。分别于染毒后第0、2、5天进行24小时代谢实验，收集24AJ、时尿液，检测尿中K<'+>、Na<'+>、Cl<'->、GLU、Cr；其后按(2)的方法处理动物，用多元相关分析法分析血中K<'+>、pH、尿K<'+>、pH与肾HKA活性的相关关系影响。 (4)取SD大鼠肾小管进行上皮细胞原代培养，角蛋白免疫荧光法鉴定上皮细胞，免疫荧光法观察HKA在集合管细胞上的表达情况，用膜片钳全细胞记录观察TMT对集合管细胞钾通道的影响，用激光共聚焦方法观察TMT对集合管细胞内pH的影响。 结论: TMT抑制了肾HKA的活性，引起机体对钾重吸收和氢分泌的障碍，导致钾经肾流失和氢在体内的潴留，出现了低钾血症和酸中毒。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词表

第一章前言

1.1序言

1.2国内外研究现状及分析

1.3本论文的研究目的和意义

1.4本论文的技术路线

第二章TMT对大鼠肾组织匀浆氢钾ATP酶活性的影响

2.1材料

2.2反应条件的研究

2.3不同浓度TMT，不同反应时间对肾匀浆HKA酶活性的影响

2.4不同浓度TMT对肾HKA酶和NKA酶活性的影响

2.5 小结

第三章TMT对肾氢钾ATP酶的抑制作用剂量反应关系

3.1材料与方法

3.2结果

3.3讨论

3.4小结

第四章TMT对肾氢钾ATP酶抑制作用的时间反应关系

4.1材料与方法

4.2结果

4.3讨论

4.4小结

第五章TMT对肾集合管上皮细胞K+通道和H+的影响

5.1肾集合管细胞原代培养

5.2 TMT对肾集合管细胞上钾通道的影响

5.3 TMT对肾集合细胞内pH的影响

5.4小结

讨论

总结

参考文献

综述肾脏H+-K+-ATP酶的研究进展

学位论文研究所在单位——广东省职业病防治院简介

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