STAg联合ESA滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用

摘要

本文研究目的：建立经口感染弓形虫RH株速殖子垂直传播小鼠模型，然后观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用，探讨STAg联合排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens，ESA)滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用，为研制阻断弓形虫垂直传播疫苗提供实验依据。 研究方法：分三部分： 第一部分：54只妊娠0天的BALB/c孕鼠随机分为6组，于妊娠第8天，分别用0、1000、2000、4000、8000、16000个弓形虫速殖子灌胃感染，妊娠第18天处死，记录活胎率，测定母鼠肝、胎盘和胎仔脑组织弓形虫抗原。 第二部分：130只5～6周龄BALB/c处女鼠随机分为2个大组：PBS组和STAg组。PBS组以PBS 20μl/只滴鼻，STAg组以STAg 20μg/只滴鼻，免疫2次，间隔2周。末次免疫后处女鼠与雄鼠以2：1分批同笼交配，各组按免疫后攻虫时间不同再分为1，2，3组，每组10只。妊娠第8天(分别对应末次免疫后第11天、第17天、第23天)用8000个/只速殖子灌胃攻击小鼠。妊娠第18天颈椎脱臼处死，记录孕鼠感染率、活胎率，称重脾脏、胸腺重量，采集母鼠肠液进行IgA检测，测定母鼠肝、胎盘和胚胎脑组织弓形虫抗原。 第三部分：BALB/c处女鼠40只随机分为4组：PBS组、STAg组、ESA组和联合抗原(STAg+ESA)组，每组10只。STAg组、ESA组和联合抗原(STAg+ESA)组分别用20μg/只STAg、20μg/只ESA和20μg/只联合抗原(10μg STAg+10μg ESA)滴鼻，PBS组用PBS以20μl/只滴鼻，免疫2次，间隔2周。末次免疫后第13天处女鼠与雄鼠以2：1分批进行同笼交配。妊娠第8天用8000个速殖子/只灌胃攻击全部小鼠。妊娠第18天颈椎脱臼处死，记录孕鼠感染率、活胎率，计数脾组织内弓形虫速殖子，检测母鼠小肠冲洗液slgA和血清IgG抗体水平，测定母鼠肝、胎盘和胎仔脑组织弓形虫抗原。 研究结果： 不同剂量弓形虫经口感染孕鼠后，孕鼠死亡率与胎盘和胚胎感染率均随感染剂量的增加而升高，而活胎率下降。1000、2000组的胎盘、胚胎未发生感染，4000组的胚胎感染率5.13％，16000组的胚胎感染率20.00％，但孕鼠的健康状况差、死亡率高，均不适宜建立弓形虫垂直传播动物模型。而8000组孕鼠既有较高的存活率，又可保证胎盘和胚胎较高的感染率。 用可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)鼻内免疫小鼠后，STAg第1、2、3组和PBS第1、2、3组孕鼠感染率和死亡率无统计学差异。STAg第3组活胎率要明显高于PBS第1组、2组和3组(P<0.05)。各组脾脏重量未见明显变化；STAg第3组小鼠胸腺重量低于其它组(P<0.05)。STAg第3组孕鼠肠液sIgA高于除STAg第2组外的其它组(P<0.05)：STAg第1组、2组、3组孕鼠感染率随免疫时间的增加而减少，而活胎率增高，胎盘、胚胎感染率随免疫时间的增加而减少。STAg第3组的胚胎感染率低于其它组。可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen，STAg)联合排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens，ESA)鼻内免疫小鼠后，STAg组、ESA组和联合抗原组孕鼠感染率低于PBS组，但无统计学差异。PBS组活胎率显著低于ESA组和联合抗原组(P<0.01)。STAg组、ESA组和联合抗原组脾组织内虫荷(速殖子数)显著低于PBS组(P<0.01)。联合抗原组和ESA组小肠冲洗液特异性sIgA均显著高于PBS组(P<0.01)；PBS组、STAg组、ESA组、联合抗原组血清IgG含量依次增高，但无显著性差异。联合抗原组滴鼻免疫小鼠其胚胎感染率均低于其他组。 研究结论：孕鼠灌胃感染8000个速殖子为建立弓形虫垂直传播小鼠模型的适宜剂量。STAg20μg/只滴鼻免疫小鼠(免疫2次，间隔2周)，末次免疫后第23天攻虫可有效降低母鼠感染率及胎盘和胚胎的感染率。STAg联合ESA鼻内免疫小鼠的效果优于单独STAg或ESA， STAg联合ESA(1：1)20μg/只滴鼻免疫BALB/c小鼠(免疫2次，间隔2周)，于末次免疫后第23天攻虫可降低母鼠感染率及胎盘和胚胎的感染率。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词

第一章 实验一经口感染弓形虫垂直传播小鼠模型的建立

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二章 实验二STAg滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三章实验三STAg联合ESA滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第四章文献综述

附录

个人简历

致谢