氧化苦参碱拮抗石英-巨噬细胞培养上清液对肺成纤维细胞增殖信号的影响

摘要

目的：通过体外实验探讨石英-巨噬细胞(AM)培养上清液联合氧化苦参碱(OM)对肺成纤维细胞增殖信号的影响。 方法：对SD大鼠乳鼠肺成纤维细胞进行原代培养和传代培养，传至4-5代后，用石英-AM培养上清液联合OM刺激成纤维细胞，培养一定时间，用氯氨T法检测上清液中羟脯氨酸的含量；用免疫细胞化学技术测定成纤维细胞膜Gq蛋白、成纤维细胞内磷脂酶C(PLC)和成纤维细胞内蛋白激酶C(PKC)的表达；用流式细胞技术检测成纤维细胞内Ca2+的含量。 结果： 1．羟脯氨酸含量结果显示：与空白对照组相比，石英-AM培养上清液作用于成纤维细胞时羟脯氨酸含量显著增高(P＜0.05)，加入OM后较上清液单独作用组羟脯氨酸含量降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2．Gq蛋白表达结果显示：在不同时间点，上清液单独作用组Gq表达量相对值明显高于空白对照组(P＜0.05)，且随作用时间的增加Gq蛋白表达呈现逐渐升高趋势。上清液联合OM组成纤维细胞膜上Gq表达量相对值与空白对照组变化不明显，无统计学上的差异。 3．PLC结果显示：在不同时间点。上清液单独作用组成纤维细胞PLC表达阳性单位数明显高于空白对照组(P＜0.05)，且随着作用时间的增加，成纤维细胞PLC表达阳性单位数呈现逐渐升高趋势。而上清液联合OM组成纤维细胞PLC表达阳性单位数值明显高于空白对照组(P＜0.05)，其中在30min和60min时间点，上清液联合OM组成纤维细胞PLC表达阳性单位数明显低于上清液组(P＜0.05)。 4．PKC结果显示：在不同时间点，上清液单独作用组成纤维细胞PKC表达阳性单位数均明显高于空白对照组(P＜0.05)，且随着作用时间的增加，成纤维细胞PKC表达阳性单位数呈现逐渐升高趋势，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。而上清液联合OM作用组成纤维细胞PKC表达阳性单位数值均明显高于对照组，其中在30min和60min时间点，上清液联合OM作用组成纤维细胞PKC表达阳性单位数明显低于上清液单独作用组，其差异均具有统计学意义(P＜0.05)。 5．细胞内游离Ca2+结果显示：在30min和60min时间点，上清液单独作用组细胞荧光强度(F)值均较对照组明显增高(P＜0.05)，且随作用时间的增加，实验组间荧光强度值呈现逐渐升高趋势，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。在60min时间点，上清液联合OM作用组较上清液单独作用组明显降低，其差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论： 1．石英-AM培养上清液对成纤维细胞增殖和胶原合成有促进作用，这种促进作用与作用时间有一定关系。 2．在石英-AM培养上清液促成纤维细胞增殖过程中膜Gq蛋白表达上调，可能有扩大效应的作用。 3．石英-AM培养上清液可能通过活化成纤维细胞膜上Gq蛋白介导的Ca-IP3和DAG-PKC途径促进成纤维细胞的增殖。 4．中药OM抑制纤维化的作用可能与成纤维细胞膜上Gq蛋白介导的Ca-IP3和DAG-PKC通路有关。

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