膀胱癌细胞系T24特异性导向小分子多肽的筛选

摘要

目的：1．利用噬菌体随机七肽库筛选能够与膀胱移行细胞癌细胞系T24 特异性结合的小分子多肽。2．对筛选出的小分子多肽进行序列分析并进行特异性的初步研究。
　　 方法：在膀胱癌细胞系T24 持续传代培养期间，利用噬菌体随机七肽库对膀胱癌细胞系T24进行4 轮结合-洗脱-扩增-再结合的筛选，从第4 轮筛选后的噬菌体库中随机挑选20个阳性单克隆，扩增后提取单克隆DNA 并测其序列，得出多肽序列进行对比分析。同时对随机挑选的20个阳性噬菌体单克隆和每轮筛选后的噬菌体库进行与野生型VcsM13 噬菌体的竞争结合实验，以及对SW620、PC-3两种不同组织来源细胞系的特异性结合分析，以初步明确筛选后的单克隆对膀胱癌细胞系T24的特异性结合能力。
　　 结果：1．随着每轮结合、洗脱及扩增的筛选，与细胞结合率低的噬菌体比例逐轮下降，而具有较强亲和力的噬菌体则被逐步扩增富集，回收率不断提高。而第3、4 轮筛选虽然回收率有所增加，但数量级未增加至109。2．与野生型VcsM13 噬菌体的竞争结合实验结果显示第4 轮筛选后随机挑选的20个单克隆中有18个具有较高的结合力，均为野生型M13的10倍以上，最高达120倍，同时，4 轮筛选的噬菌体库中除第1轮外，其他3 轮的结合力也为野生型M13的10倍以上。3．对SW620、PC-3两种不同组织来源细胞系的特异性结合分析结果显示筛选后的噬菌体库比其他两种细胞系有很高的特异性结合能力，其相对结合倍数均达到10倍以上。4．对第4 轮筛选后随机挑选的20个单克隆测序，结果显示有四条多肽序列出现频率较高，分别为-SNARGTE-、-VSEKNRQ-、-DSIYNAR-、-DWSGACS-，且其中重复率高的三条多肽均含有-SNR-。
　　 结论：通过噬菌体随机七肽库对膀胱癌细胞系T24 进行全细胞筛选得到的噬菌体多肽能与膀胱癌细胞T24 特异性结合，可初步作为膀胱癌靶向诊断和导向药物研究的载体，并且其中重复率高的三条多肽均含有-SNR-序列，推测此三肽序列可能为膀胱癌细胞T24表面特异性结合的决定性肽段。

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前言

第一部分主要材料及试剂

第二部分实验方法

综述：膀胱癌靶向诊断及治疗载体的研究进展

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