青蒿素类抗疟药动物体内药动学及体外代谢研究

摘要

青蒿素类药物在疟疾治疗中，最大的不足是复发率高。体内实验已发现连续多日服用青蒿素类药物后，血药浓度未能达到稳态，相反较第1日的血药浓度有大幅度降低，这种时间依赖性药动学被认为是由自身诱导代谢的结果，直接导致该药的复发率高。体内实验同时发现连续用药后半衰期基本不变，因此推测自身诱导代谢主要诱导了首过代谢，对系统清除影响不大，因而造成口服总体清除率(CL/F)增加，而对半衰期影响不大。静注给药能避免首过代谢，因此在本实验中通过比较口服和静注不同给药途径给药后的第5日药动学，考察给药途径对时间依赖性药动学的影响，研究首过代谢在自身诱导代谢中的作用。
　　 另外，通过肝微粒体体外孵化实验，考察青蒿素、双氢青蒿素在不同处理组大鼠肝微粒体孵化后药物的代谢情况。
　　 一、青蒿素在犬体内药物动力学研究
　　 建立了液相色谱-质谱联用方法测定犬血浆中青蒿素（Artemisinin, ART）的浓度。以蒿甲醚（Artemether, AMT）为内标，采用乙腈和10mmol·L-1醋酸铵（含0.1％甲酸）溶液（85:15，v/v）为流动相，流速为0.3 mL·min-1，Agilent-C18（50×4.6 mm, 1.8 μm）色谱柱为分析柱，采用电喷雾电离源（ESI），多反应监测方式进行正离子检测，用于定量分析的离子反应分别为m/z 300.2→209.1（ART）和m/z 316.1→267.2（AMT）。该方法的线性范围为2.0-500.0ng?mL-1，浓度定量下限为2.0ng?mL-1。
　　 健康犬10只，随机分为2组，一组采用口服方式连续给药5日，每日1000mg，另一组采用静注方式连续给药5日给药，每日60mg，各组分别于第1日、第5日采血，应用液相色谱-质谱联用方法测定血浆中青蒿素的含量并计算主要药动学参数。口服组达峰浓度(Cmax)和达峰时间(Tmax)为实测值。以半对数作图法，由消除相末几个浓度点计算消除速度常数k，并根据k 计算t1/2，利用软件计算AUC0-t、AUC0-∞。第1日口服给药后Cmax为29.1±9.9 ng?mL-1，Tmax为1.9±0.7 h，t1/2为2.6±0.6 h、AUC0-t为88.2±26.8 h?ng?mL-1，AUC0-∞为93.5±28.0h?ng?mL-1。连续5日口服给药后血药浓度已基本测不出，未求算药动学参数。静注组以血药浓度的对数对时间作图得直线，由直线斜率和截距求出初始浓度C0消除速度常数k，并根据C0、k 计算V、t1/2。K和V的乘积即CL, C0和k 之比算AUC0-t。
　　 第1日静注给药后的，t1/2为0.9±0.7 h，CL为27.8±12.9 L·h-1，V为26.0±10.6 L，AUC0-t为3568.9±3902.2 h·ng·mL-1。静注连续给药5日后的t1/2为0.2±0.04 h，CL为20.8±9.5L·h-1， V为7.5±4.5 L，AUC0-t为3363.7±1375.9 h·ng·mL-1。口服第5日组给药后血药浓度明显低于单次给药组，静注组第5日给药后t1/2、CL、AUC0-t 无明显差异。结果表明多剂量口服给药后，血药浓度呈现显著的时间依赖性降低，而静注给药未发现类似现象，表明自身诱导代谢主要影响了首过代谢过程，此外该药在犬体内的口服生物利用度很低，口服给药的血药浓度远低于静注给药。
　　 二、双氢青蒿素在犬体内药物动力学研究
　　 建立了液相色谱-质谱联用方法测定犬血浆中双氢青蒿素（Dihydroartemisinin, DHA）的浓度。以青蒿素（Artemisinin, ART）为内标，采用乙腈和10mmol·L-1醋酸铵（含0.1％甲酸）溶液（65:35，v/v）为流动相，流速为0.3 mL·min-1，Agilent-C18（50×4.6 mm, 1.8μm）色谱柱为分析柱，采用电喷雾电离源（ESI），多反应监测方式进行正离子检测，用于定量分析的离子反应分别为m/z 267.2→163.1(DHA)和m/z 300.3→209.2 (ART)。该方法的线性范围为2.0-500.0ng?mL-1，浓度定量下限为2.0ng/mL-1。
　　 健康犬10只，随机分为2组，一组采用口服方式连续给药5日，每日160mg，另一组采用静注方式连续给药5日给药，每日60mg，各组分别于第1日、第5日采血。应用液相色谱-质谱联用方法测定血浆中双氢青蒿素的含量并计算主要药动学参数。口服组达峰浓度(Cmax)和达峰时间(Tmax)为实测值。以半对数作图法，由消除相末几个浓度点计算消除速度常数k，并根据k 计算t1/2。利用软件计算AUC0-t、AUC0-∞。第1日口服给药后Cmax为57.6±38.5 ng?mL-1，Tmax为2.1±0.7 h， t1/2为2.8±0.8 h，AUC0-t为165.4±77.6h?ng?mL-1，AUC0-∞为177.8±71.7 h?ng?mL-1。连续5日口服给药后血药浓度已基本测不出，未求算药动学参数。静注组以血药浓度的对数对时间作图得直线，由直线斜率和截距求出初始浓度C0消除速度常数k，并根据C0、k 计算V、t1/2。K和V的乘积即CL，C0和k 之比算AUC0-t。第1日静注给药后的，t1/2为0.4±0.1h，CL为114.7±46.3 L·h-1， V为61.8±37.9 L，AUC0-t为574.8±162.3 h·ng·mL-1。连续5日静注给药后的t1/2为0.5±0.1h，CL为101.6±43.6 L·h-1，V为61.8±37.9 L，AUC0-t为722.7±396.9 h·ng·mL-1。口服第5日组给药后血药浓度明显低于单剂组，静注组第5日给药后V、CL、AUC0-t 无明显差异。
　　 结果表明多剂量口服给药后，血药浓度呈现显著的时间依赖性降低，而静注给药未发现类似现象，表明自身诱导代谢主要影响了首过代谢过程，此外该药在犬体内的口服生物利用度很低，口服给药的血药浓度远低于静注给药。
　　 三、青蒿素、双氢青蒿素在大鼠肝微粒体代谢动力学
　　 将40只健康SD大鼠分为8组（完全空白组、口服溶剂对照组、ART 多剂量口服组、DHA 多剂量口服组、ART 多剂量静注组、DHA 多剂量静注组、ART 静注溶剂对照组、DHA 静注溶剂对照组），连续给药5日，制备大鼠肝微粒体。
　　 应用液质联用分析方法考察青蒿素、双氢青蒿素在不同处理组鼠肝微粒体中的孵化情况。通过药物和肝微粒体孵化一定时间后剩余药物浓度，计算代谢率。青蒿素与完全空白组、口服溶剂对照组、ART 静注溶剂对照组、ART 多剂量口服组及ART 多剂量静注组微粒体中孵化60min后，代谢率分别为35.3％、37.3％、39.2％、53.2％、36.6％。双氢青蒿素与完全空白组、口服溶剂对照组、DHA 静注溶剂对照组、DHA 多剂量口服组组及DHA 多剂量静注组微粒体中孵化60min后，代谢速率分别为44.6％、47.1％、44.1％、51.8％、38.7％。ART 口服组代谢速率大于其他对照组，DHA 多剂量口服组代谢速率略大于其他对照组，但ART、DHA 多剂量静注组无类似现象。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

第一章 青蒿素在犬体内分析方法建立及药动学研究

第二章双氢青蒿素在犬体内分析方法建立及药动学研究

第三章青蒿素与双氢青蒿素在不同处理组鼠肝微粒体中代谢考察

结论

参考文献

个人简介

致谢