P16INK4A的表达、P16基因甲基化水平与高危型HPV感染在宫颈病变中的相关性研究

摘要

背景和目的：
　　 宫颈癌为全球妇女的第二大恶性疾病，发病率仅次于乳腺癌，严重威胁着妇女的健康和生命。高危型HPV感染为宫颈癌患病主要致病因素，但其并非该病的唯一病因。本课题旨在研究随着宫颈上皮细胞病变程度的加重，宫颈脱落细胞中HPV感染情况，P16基因CpG岛甲基化水平及P16INK4A的表达情况及三者之间的相互关系。
　　 方法：
　　 选择在山西医科大学第二医院妇产科门诊2011年6月-2011年12月门诊行TCT检测分级为正常，ASCUS，LSIL，HSIL的患者共120例，另选择经阴道镜确诊为SCC的患者30例，采用免疫组化的方法检测P16INK4A的表达情况，SPR-HPV基因分型试剂盒检测HPV感染状态以及MSP方法检测P16基因甲基化状态，所有检查进行前均征得患者同意。采用SPSS13.0软件对实验结果数据进行统计分析。
　　 结果：
　　 1.150例入选患者中，HPV检测结果阳性为85例，占56.67％。其中正常患者为4例，占13.33％，ASCUS为5例，占16.67％，LSIL为18例，占60.00％，HSIL为28例，占93.33％，SCC为30例，占100.00％。经χ2检验P＜0.05，表明高危型HPV的阳性率在细胞学各级分组中有显著性差异，具有统计学意义，经线性趋势检验，P＜0.05，表明随着病变程度的加重，高危型HPV的阳性率显著升高。
　　 2.150例入选患者，P16INK4a阳性者为87例，占58.00％。其正常患者为1例，占3.33％，ASCUS为14例，占46.67％，LSIL为18例，占60.00％，HSIL为25例，占83.33％，SCC为29例，占96.67％。经χ2检验P＜0.05，表明P16INK4a阳性率在细胞学各级分组中有显著性差异，具有统计学意义，经线性趋势检验，P＜0.05，表明随着病变程度的加重，P16INK4a的阳性率显著升高。
　　 3.150例入选患者中，P16基因甲基化检测阳性者为22例，占73.33％。其中正常者O例，占O％，ASCUS为1例，占3.33％，LSIL为4例，占13.33％，HSIL为7例，占23.33％，SCC为10例，占33.33％。经χ2检验P＜0.05，表明P16基因启动子区甲基化的阳性率在细胞学各级分组中有显著性差异，具有统计学意义，经线性趋势检验，P＜0.05，表明随着病变程度的加重，P16基因启动子区甲基化的阳性率显著升高。
　　 4.150例入选患者中，高危型HPV阳性者85例，其中高危型HPV阳性者中P16INK4A呈阳性表达的为50例，呈阴性表达的为35例，阳性率为58.82％;高危型HPV阴性者为63例，阴性者中P16'NK4A呈阳性表达的为37例，旱阴性表达的为28例，阳性率为56.92％。经χ2检验P>0.05，表明P16INK4A的阳性率在高危型HPV感染与末感染组中表达无显著性差异，提示HPV感染情况不同的寓颈细胞中P16INK4A的表达趋于一致。
　　 5.150例入选患者中，高危型HPV表达阳性的有85例，其中P16INK4A表达阳性者为50例，P16基因甲基化阳性者为2例；高危型HPV表达阴性的有65例，其中P16lNK4A表达阳性者为37例，P16基因甲基化阳性者为20例。经Spearman相关分析，P16INK4A的阳性表达与P16基因启动子区甲基化的阳性表达在高危型HPV阳性时呈负相关，相关系数为-0.470，P＜0.05，具有统计学意义；两者在高危型HPV阴性时无显著性相关，P>0.05，不具有统计学意义。
　　 结论：
　　 1.高危型HPV检测，P16INK4A免疫细胞化学检测技术以及P16基因启动子去甲基化检测可以成功地用于液基细胞学中。
　　 2.P16INK4A在正常、ASCUS及LSIL组不表达，在HSIL和SCC组中显著表达，因此将P16INK4A的检测应用于宫颈液基细胞学中有助于检测出HSIL和SCC。
　　 3.P16INK4A的表达情况与高危型HPV感染相关性不大，说明P16INK4A的高表达存在着除HPV感染意外的另一种不同机制，因此我们推测可以用P16INK4A的表达情况来辅助诊断那些高危型HPV感染阴性的宫颈病变。
　　 4.P16基因启动子区甲基化属于宫颈癌发生的早期事件，而且在HPV相关的宫颈癌中很少发生，其机制可能是HPV感染的替代作用；另外在P16基因启动子甲基化的宫颈癌中P16INK4A呈高表达状态，提示该基因的甲基化可能并无基因沉默作用。

目录

声明

中英文缩写对照表

1．研究对象与方法

1．1 研究对象

1．2 仪器和试剂

1．2．1 主要仪器

1．2．2 主要试剂

1．2．3 主要试剂的配置

1．3 实验方法

1．3．1 液基细胞学分组

1．3．2 P16INK4A检测

1．3．3 HPV检测

1．3．4 MSP法检测P16的甲基化

1．4 统计方法

2．结果

2．1 高危型HPV感染的检测结果：

2．2 P16INK4A的表达情况结果：

2．3 P16基因CpG岛甲基化的结果：

2．4 高危型HPV感染与P16INK4A表达情况的比较分析

2．5 高危型HPV感染与P16INK4A的表达及P16基因CpG岛甲基化情况的比较分析

3．讨论

3．1 高危型HPV感染与宫颈病变的关系

3．2 高危型HPV感染与P16INK4A表达的相关性分析

3．3 P16基因甲基化、P16INK4a的表达与高危型HPV感染的相关性分析

4．结论

参考文献

综述

附录

个人简介

致谢