蒲公英花中黄酮类化合物的分离提取及其生物效应研究

摘要

本文旨在确定蒲公英花中总黄酮的最佳提取和纯化工艺，分离得到蒲公英花中的黄酮类化学成分，并对其中一些成分进行含量测定；初步探讨蒲公英花提取物的抗氧化、抗肿瘤以及抑菌活性。主要内容如下：
　　 1.采用超声波提取技术，考察乙醇浓度、料液比、超声功率、温度等因素对蒲公英花中总黄酮及总酚酸提取率的影响。结果表明，用75％乙醇，料液比1∶100，超声功率100W，在55℃的条件下超声提取30min所得总黄酮与总酚酸的含量最高。该工艺操作简便，提取效率高，重现性好，并在供试质量浓度范围内呈现量效关系。
　　 2.采用邻苯三酚自氧化法和邻二氮菲-二价铁氧化法分别测定蒲公英花提取液对超氧阴离子自由基和羟自由基的半数抑制率IC50为96.1μg·mL-1和7.7μg·mL-1；蒲公英花提取液可使花生油的过氧化值(POV)显著降低，其效果与0.10％的维生素C相当。提取液对超氧阴离子自由基、羟自由基和油脂自氧化均有较好的清除效果。
　　 3.采用单因素法考察大孔吸附树脂纯化提取物的最佳工艺，对上样溶液浓度、pH、洗脱剂浓度和流速等进行考察，并将其与有机溶剂萃取法进行对比。结果表明，树脂法纯化蒲公英花中总黄酮的最佳纯化工艺参数为：在D-101型大孔吸附树脂柱中，上样溶液浓度为1.238mg·mL-1(pH=3.0)，室温下以流速2.0BV·h-1吸附饱和，依次用4BV水、20％、50％、70％乙醇溶液以2BV·h-1的流速洗脱，收集50％、70％乙醇洗脱液，测得黄酮纯度为92.56％，吸附率为80.65％，解吸率为53.44％，回收率为42.75％。有机溶剂萃取法结果表明石油醚相中黄酮纯度为41.9％，回收率为34.9％；乙酸乙酯相中黄酮纯度为92.4％，回收率为40.5％。
　　 4.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度蒲公英提取物对肝癌细胞系HepG2增殖的抑制作用，结果表明，随着蒲公英提取物作用浓度的增加(0.3～1.5mg·mL-1)、作用时间(24、48和72h)的延长，其HepG2对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。三个作用时间点的最大抑制率分别达71.9％、81.3％及89.5％，其IC50分别为0.860、0.583及0.404mg·mL-1。
　　 5.将蒲公英花的乙酸乙酯相提取液与肉汤稀释液配成不同浓度的供试液，测定其最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明，其对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌和绿脓杆菌敏感：对大肠埃希菌低度敏感。
　　 6.采用聚酰胺和硅胶层析柱对总黄酮类化合物进行分离得到单体，经核磁氢谱、碳谱和质谱解析确定结构，并采用HPLC法测定各个提取物中木犀草素的含量。从蒲公英花中分离得到4个化合物，结构鉴定其中2个(1-2)分别是木犀草素、金圣草素。并首次建立了蒲公英花中木犀草素含量测定的HPLC法，色谱条件为：色谱柱ZORBAXEclipseXBD-C18(5μm，250×4.6mm)，流动相为甲醇：水：醋酸=60∶39∶1，检测波长350nm，线性范围为1.0～5.Oμg·mL-1(r=0.9999)，回收率为99.18％(RSD=2.94％)。该方法简便、准确、重现性好，可作为评价蒲公英花质量的指标。

目录

声明

摘要

前言

第一章 蒲公英花中黄酮类化合物提取工艺

1 仪器材料

2 实验方法

3 结果与讨论

4 结论

第二章 蒲公英花粗提物抗氧化性能

1 材料与仪器

2 试验方法

3 结果与讨论

4 结论

第三章 蒲公英花中总黄酮的纯化工艺

1 材料与仪器

2 实验方法

3 结果与讨论

4 结论

第四章 蒲公英花抗肿瘤作用及抑菌活性有效部位的初探

1 材料与方法

2 实验方法

3 结果与讨论

4 结论

第五章 蒲公英花中黄酮类化合物的分离

1 仪器材料

2 试验方法

3 实验结果

4 结论

第六章 蒲公英花中木犀草素的含量测定

1 实验仪器和材料

2 实验方法

3 结果与讨论

4 结论

总结

参考文献

蒲公英花研究进展

1 原植物

2 化学成分

3 药理作用

4 黄酮类化合物简介

参考文献

附图

个人简介及发表论文

致谢