亚硫酸钠对HL-7702肝细胞极低密度脂蛋白组装途径的影响

摘要

目的：
　　 动物实验显示亚硫酸钠接触可引起肝细胞内脂肪沉积，为探究其原因，观察了食品添加剂亚硫酸钠(Na2SO3)对人肝HL-7702细胞甘油三酯(TG)含量和与肝细胞极低密度脂蛋白(VLDL)组装密切相关的因子在转录、翻译水平的影响，以期找到亚硫酸盐影响肝细胞TG或VLDL分泌的关键分子和环节，确定亚硫酸盐是否通过影响极低密度脂蛋白的包装过程从而影响其最终的分泌外排。
　　 方法：
　　 以人正常二倍体肝细胞株HL-7702(简称L-02)为研究对象。L-02细胞以含10％小牛血清(FBS)的高糖DMEM培养基培养，经不同浓度Na2SO3及阳性对照1mM油酸作用24h、48h后，采用CCK-8试剂盒检测细胞活性；油红O染色法观察肝细胞脂肪变性；甘油三酯甘油磷酸氧化酶法(GPO-POD酶法)测定试剂盒检测细胞内TG含量；WestemBlotting检测细胞外培养上清中VLDL的分泌；荧光定量PCR(Q-PCR)法检测肝细胞内微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)、二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)、甘油三酯水解酶(TGH)基因的mRNA表达。
　　 结果：
　　 1、不同浓度Na2SO3对L-02细胞活性的影响：当接触染毒24h、48h后，Na2SO3呈剂量依赖性的降低细胞存活率(r24h=-0.941,p＜0.01;r48h=-0.915，p＜0.01)，其中10mM、2.5mM、0.625mM、0.156mM Na2SO3作用组细胞活性与正常对照组相比，差异具有统计学意义(p＜0.05）。说明Na2SO3可直接引起肝细胞活性的降低。
　　 2、不同浓度Na2SO3对L-02细胞内脂肪沉积的影响：经油红O染色观察发现，阴性对照组细胞间结合紧密，呈多边形，单层排列，无重叠生长，细胞界限清晰，贴壁良好。随着Na2SO3染毒剂量的增加，可见细胞数量有所减少，细胞间隙增加。染毒24h、48h后，各Na2SO3染毒组均未见橘红色脂肪着染颗粒，只有阳性对照油酸组可见明显红色脂滴。说明Na2SO3在本实验条件下未能引起胞内明显脂肪沉积。
　　 3、不同浓度Na2SO3对L-02细胞内TG含量的影响：接触染毒24h和48h后，10mM Na2SO3组细胞内TG含量增加，与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.05），阳性对照1mM油酸组与阴性对照组比较，细胞内TG水平明显增高（P＜0.05）。说明一定剂量Na2SO3可引起肝细胞TG含量增加。
　　 4、不同浓度Na2SO3对L-02细胞VLDL分泌的影响：染毒24h后，10mM Na2SO3处理组培养上清中VLDL水平与阴性对照组相比明显增加，经检验，差异有统计学意义(P＜0.05)；染毒48h后，各处理组培养上清中VLDL水平与阴性对照组相比无明显变化，经检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　 5、不同浓度Na2SO3对L-02细胞MTP、DGAT2、TGH mRNA表达的影响：接触染毒24h、48h，各处理组细胞MTP、DGAT2 mRNA的表达量与阴性对照组相比均无明显变化，差异无统计学意义(P＞0.05)；接触染毒24h，10mM Na2SO3、0.5mM Na2SO3处理组肝细胞内TGH mRNA表达升高，与阴性对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。接触染毒48h，10mM Na2SO3组及阳性对照1mM油酸组肝细胞内TGHmRNA表达明显降低，与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。而2.5mM Na2SO3、0.1mM Na2SO3处理组肝细胞内TGH mRNA表达升高，与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、Na2SO3对L-02肝细胞活性的抑制作用呈剂量依赖性，说明Na2SO3具有肝细胞毒性作用。
　　 2、高浓度Na2SO3可增加肝细胞内TG含量，引起肝细胞脂肪代谢紊乱。
　　 3、一定条件下Na2SO3可使L-02肝细胞内TG累积进而促进VLDL分泌。
　　 4、Na2SO3染毒24h引起VLDL分泌增多可能与TGH基因mRNA表达上调有一定关联；染毒48h引起L-02肝细胞内TG含量增多可能与下调TGH基因mRNA表达有关。

目录

封面

声明

中英文缩写词对照表

前言

第一章 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 数据处理和统计分析

第二章 结果

2.1 不同浓度Na2SO3对L-02肝细胞活性的影响

2.2 不同浓度Na2SO3对L-02肝细胞内脂肪沉积的影响

2.3 不同浓度Na2SO3对L-02肝细胞内TG含量的影响

2.4 不同浓度Na2SO3对L-02肝细胞VLDL分泌的影响

2.5 不同浓度Na2SO3对L-02肝细胞内MTP、DGAT2、TGH mRNA表达的影响

第三章 讨论

3.1 Na2SO3对L-02肝细胞活性的影响

3.2 Na2SO3对L-02肝细胞TG含量的影响

3.3 Na2SO3对L-02肝细胞VLDL分泌的影响

3.4 Na2SO3对L-02肝细胞中VLDL组装相关因子的基因水平的影响

第四章 结论

参考文献

综述

个人简历

致谢