RNA干扰介导肌肉环指蛋白-1(MuRFl)基因下调延缓失神经骨骼肌萎缩的基础研究

摘要

目的：应用RNA干扰技术体外抑制大鼠MuRF1基因表达的效果，以期筛选出针对MuRF1基因抑制效果最佳的siRNA重组质粒。
　　方法：根据大鼠MuRF1基因的mRNA序列，设计四组干扰序列，即siRNAMuRF1-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，利用lipofactamine2000转染试剂将siRNA重组质粒转染大鼠成肌细胞系L6，于转染后48h与72h，采用实时定量PCR和Westernblot或免疫印迹检测其对MuRF1表达的抑制效果。
　　结果：1.实时定量PCR显示四组干扰质粒MuRF1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ对基因MuRF1的mRNA的抑制率在转染后48h分别为67﹪、31﹪、11﹪，20﹪,不同干扰序列的抑制效果有差异(F=4.527，P=0.024)；72h分别为79﹪、59﹪、50﹪和61﹪，不同干扰序列的抑制效果有差异(F=19.088，P<0.001),与48h相比，抑制效应更为明显，但以siRNAMuRF1-Ⅰ的抑制效果最为明显（t=8.201,P<0.001）。2.使用Western印迹灰度分析显示四组干扰序列对基因MuRF1的蛋白的抑制率在转染后48h分别为61﹪、40﹪、9﹪，15﹪，不同干扰序列的抑制效果有差异(F=4.286，P=0.028);72h分别为70﹪、54﹪、30﹪，46﹪，不同干扰序列的抑制效果有差异(F=3.731，P=0.042);与48h相比，MuRFl-Ⅰ、MuRFl-Ⅱ抑制效应与对照组相比有显著性差异（tⅠ=3.256,P=0.009;t=2.512,P=0.03）,但MuRFl-Ⅲ和MuRFl-Ⅳ与对照组相比仍无显著性差异（P>0.05）。四对序列中，以siRNAMuRF1-Ⅰ的抑制效果最为明显。蛋白水平的抑制效果与mRNA水平基本一致。
　　结论：成功筛选出对MuRF1基因有效的siRNA重组质粒，即siRNAMuRF1-Ⅰ，为后期利用RNA干扰技术研究MuRF1基因的功能和治疗骨骼肌萎缩奠定基础。

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RNA干扰介导肌肉环指蛋白-1(MuRFl)基因下调延缓失神经骨骼肌萎缩的基础研究

材料与方法

1 材料

2 方法

3.统计学方法：

结 果

一、转染效率的检测

二、MuRFl基因siRNA重组质粒瞬时转染后mRNA表达变化

三、MuRFl基因siRNA重组质粒瞬时转染后蛋白表达变化

附 图

一、转染效率的检测

二、MuRFl基因siRNA重组质粒瞬时转染后mRNA表达变化

三、MuRFl基因siRNA重组质粒瞬时转染后蛋白表达变化

讨论

结 论

参考文献

综述

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