RNA干扰介导蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx基因下调延缓失神经骨骼肌萎缩的基础研究

摘要

本课题尝试采用RNA干扰技术来下调泛素一蛋白酶体途径中编码蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx基因的表达，借此抑制失神经后骨骼肌中蛋白的高分解代谢，探讨其延缓骨骼肌萎缩的疗效，为失神经骨骼肌萎缩寻找新的治疗方法。第一部分蛋白酶体亚基RC2和泛素连接~llKVbx基因在失神经骨骼肌中的变化规律及其意义 目的：研究蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx两基因在失神经骨骼肌中的变化规律及其意义，为RNAi介导的基因治疗提供干预时间点。 方法：选用雌性SD大鼠48只，建立右下肢腓肠肌失神经支配模型，随机分为8组，每组6只，术后0天为对照组，术后1、2、3、4、5、6、M天为实验组，采用实时定量PCR检测RC2和MAFbx基因mRNA在失神经后不同时间点的变化规律，相对定量法分析其表达变化；使用Western印迹检测RC2在蛋白水平的变化规律，并对其灰度进行半定量分析。 结果：1、实时定量PCR分析结果显示RC2基因的mRNA从失神经后第l天开始表达上调，3天时达到高峰，为正常的4．98倍，随后逐渐下降，14天时降为正常的0．42倍；各组与对照组相比有显著性差异(PO．05)，第2天到第5天，第14天与正常对照组相比有显著性差异(PO．05)；转染后72h，干扰序列RC2一I在mRNA水平明显抑制了RC2的表达，抑制率达75％，与对照组相比有显著性差异(PO．05)。3、Western印迹灰度分析分析显示，转染后48h，RC2各干扰序列与对照组相比无显著性差异(P>O．05)；转染后72h，可见干扰序列RC2一I明显抑制了RC2蛋白的表达，抑制率达68％，与对照组相比有显著性差异(PO．05)，与mRNA水平的变化基本一致。4、实时定量PCR分析结果显示，转染后48h，干扰序列MAFbx—I、MAFbx一1I和MAFbx—III对MFAbx的mRNA的抑制率分别为22％、47％和25％，与对照组相比均有显著性差异(PO．05)；MAFbx组在治疗后2、3、4周均明显优于CON组(P

目录

论文相关英文缩略语注释

前 言

第一部分蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx基因在失神经骨骼肌中的变化规律及其意义

第二部分蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx基因的siRNA重组质粒的构建与鉴定

第三部分RNA干扰技术体外抑制蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx的表达

第四部分电穿孔介导蛋白酶体亚基RC2和泛素连接酶MAFbx基因siRNA重组质粒转染延缓大鼠失神经骨骼肌萎缩

全文小结

综述一 RNA干扰及其在基因治疗中的研究进展

综述二 泛素—蛋白酶体途径与骨骼肌萎缩

博士在读期间发表及待发表论文

致 谢

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