二甲双胍对缺氧/复氧诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及其机制

摘要

目的:探讨二甲双胍对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧/复氧(A/R)损伤的影响及其可能机制。 方法:体外培养HUVECs，随机分为5组:正常对照组(control)，缺氧复氧(A/R组，A/R+不同浓度(0.1、0.5、1mmol/L)二甲双胍干预组（A/R+Met0.1组、A/R+Met0.5组、A/R+Met1.0组）。建立缺氧/复氧模型，不同浓度的二甲双胍（0.1、0.5、1.0mmol/L）预处理后，流式细胞术检测(FCM)各组细胞的凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测各组上清液中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度，定量实时聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组核转录因子-κB/P65(NF-κB/P65) mRNA的表达。 结果: 1.各组内皮细胞生长状态:正常对照组细胞生长状态良好，可成铺路石样镶嵌排列，细胞呈扁平不规则多角形或者梭型，包膜完整，胞浆丰富，细胞核为圆形或椭圆形。缺氧/复氧组细胞生长状态差，细胞变圆，甚至固缩，漂浮。 2.各组细胞凋亡率:与对照组相比，A/R组的细胞凋亡率明显增加，差异显著(P＜0.05);而二甲双胍干预组细胞的凋亡率较A/R均减少，差异有统计学意义(P＜0.05);二甲双胍干预组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，其中以A/R+Met0.5组凋亡率最低。 3.各组上清液中TNF-α、ICAM-1的含量:与对照组相比，A/R组的TNF-α、ICAM-1含量明显增高，差异有统计学意义(P＜0.05)，而二甲双胍干预组细胞的TNF-α、ICAM-1含量较A/R均减少，差异有统计学意义(P＜0.05)。二甲双胍干预组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，其中以A/R+Met0.5组TNF-α、ICAM-1含量最少。 4.NF-κB/P65 mRNA的表达:与对照组比较，NF-κB/P65 mRNA表达明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05);二甲双胍干预组较A/R组NF-κB/P65mRNA的表达均下降(P＜0.05);二甲双胍各组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，其中以A/R+Met0.5组表达最低。 结论: 1、缺氧/复氧能诱导NF-κB的活化及炎症因子ICAM-1和TNF-α的表达，引起人脐静脉内皮细胞损伤。 2、二甲双胍能减轻缺氧/复氧人脐静脉内皮细胞的凋亡，其可能机制与抑制NF-κB转录活性及抑制炎症因子ICAM-1和TNF-α释放有关。 3、二甲双胍对A/R引起的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用可能存在一定的浓度相关性。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

前言

材料和方法

1．材料

2．实验方法

3．统计学方法

实验结果

1．CCK-8制定缺氧／复氧时间

2．光镜下HUVECs的形态

3．流式细胞技术检测HUVECs凋亡

4．二甲双胍对人脐静脉内皮细胞A／R损伤炎症因子表达的影响

5．二甲双胍对人脐静脉内皮细胞A／R损伤NF-κB／P65 mRNA的表选量的影响

讨论

结论

参考文献

综述 内皮损伤与冠脉无复流

个人简介

致谢