绿色荧光蛋白示踪检测骨髓间充质干细胞移植在CIA大鼠体内的迁移、定植和分布

摘要

目的：
　　GFP标记的BM-MSCs通过体外培养、扩增后移植到CIA大鼠体内，通过光学成像联合免疫组化的方法检测其在CIA大鼠免疫器官以及关节部位的迁移、定植和分布情况，探讨其修复损伤的可能机制。
　　方法：
　　1.对GFP标记的MSCs进行体外培养、扩增及鉴定。
　　2.将II型胶原与完全弗氏佐剂的混合制剂间隔14天两次免疫Wistar大鼠，从大鼠症状（大体观、关节炎指数、后肢肿胀程度）、影像学、病理学方面进行评估，建立CIA大鼠模型。随机分为早期干预组（n=20）、晚期干预组（n=20），同时设置CIA早期对照组（n=12）、晚期对照组（n=12）和正常对照组（n=12）。
　　3.尾静脉途径移植GFP-MSCs，小动物活体成像技术动态观察移植MSCs在大鼠体内的迁移过程。
　　4.于3、11、30和42天将各组大鼠的脾脏、胸腺、淋巴结和关节组织作成病理切片，通过免疫组化的方法检测移植细胞在免疫器官和炎症关节部位的迁移和分布。
　　结果:
　　1.（1）早、晚期干预组关节炎指数、关节肿胀程度较CIA对照组明显下降(P＜0.05)；
　　(2)早期干预组与晚期干预组比较，关节炎指数与关节肿胀程度降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　2.小动物活体成像技术未能动态监测到MSCs移植在CIA大鼠体内的迁移过程，动物自身荧光干扰明显。
　　3.抗GFP免疫组化法在干预组大鼠免疫器官和关节部位成功检测到GFP阳性结果，并可持续存在至少42天。
　　结论:
　　1.MSCs经尾静脉途径移植后，可迁移至CIA大鼠脾脏、淋巴结和胸腺和关节炎症部位，并可较长期（42天）定植于该组织。
　　2.GFP不适用活体示踪检测MSCs在大鼠免疫器官及关节部位的迁移。
　　3.MSCs干预对CIA大鼠有效，早期干预疗效优于晚期干预。

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前言

第一部分 骨髓间充质干细胞体外培养、扩增及鉴定

1 材料与方法

2 结 果

3 讨 论

第二部分 光学成像方法检测MSCs-GFP在CIA大鼠体内的迁移和定植

1 材料与方法

2 结 果

3 讨 论

第三部分 免疫组化方法检测MSCs-GFP移植在CIA大鼠体内的分布

1 材料与方法

2 结 果

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述: 间充质干细胞活体光学成像示踪研究新进展

致谢

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