膀胱癌靶向肽NYZL1生物学作用及其特异性鉴定

摘要

目的：
　　1.体外实验验证NYZL1对膀胱癌细胞的增殖、迁移、凋亡等生物学行为的影响，为寻找靶向肽的受体提供参考信息。
　　2.利用免疫荧光技术，检测 FITC-NYZL1分子探针与膀胱癌细胞结合的特异性，为膀胱癌的靶向性治疗提供理想载体。
　　3.在上述实验的基础上，采集临床病人的新鲜尿液，分析 FITC-NYZL1分子探针标记尿脱落细胞的特异性，为靶向肽的临床应用提供理论依据。
　　方法：
　　1.运用固相载体共价相连技术合成靶向肽 NYZL1及其对照肽 sv-NYZL1，肽段上标记异硫氰酸荧光素并纯化。通过MTT实验、损伤修复实验研究NYZL1对膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移能力的生物学影响；应用流式细胞术技术，分析NYZL1对BIU-87细胞的周期分布、凋亡情况的影响，探讨NYZL1对BIU-87细胞生物学行为的影响。
　　2.应用扫描激光共聚焦显微镜检测FITC-NYZL1与膀胱癌BIU-87、T24、5637、E-J细胞和肾癌KC细胞结合的特异性。
　　3.收集临床上膀胱癌患者新鲜尿液，纯化尿液，加入FITC-NYZL1探针孵育， LSCM检测探针与细胞的结合率，同时进行平行对照试验，取新鲜尿液进行瑞-吉染色，通过细胞化学染色，检测尿脱落细胞中癌细胞阳性率。
　　结果:
　　1.杭州中肽生化试剂公司合成 NYZL1（CSSPIGRHC）短肽和sv-NYZL1（CRIGSPHSC）对照肽（对照肽的氨基酸序列及结构与NYZL1相同，但组合顺序不同），通过HPLC及MS纯化、鉴定，所合成环肽氨基酸序列合成肽的纯度≥98％。经FITC标记，形成FITC-NYZL1探针和随机对照探针FITC-svNYZL1。
　　2. MTT实验结果显示，与对照组相比，随着肽段NYZL1浓度的升高，BIU-87细胞与其结合呈现出的OD值无明显变化（P>0.05），提示NYZL1对膀胱癌细胞的增殖无明显抑制作用；细胞生长曲线显示，与 NYZL1结合的 BIU-87细胞生长趋势与其它两组无明显差异（P>0.05），NYZL1不直接影响肿瘤细胞的生长；损伤修复实验结果显示，单位时间内，实验组划痕区域细胞的生长面积与对照组和空白对照组无明显差异，均表现细胞生长，BIU-87细胞的迁移能力不受NYZL1的影响。
　　3.流式细胞仪分析结果显示，与对照组相比，NYZL1对膀胱癌BIU-87细胞的周期分布无明显影响（P>0.05），差异无统计学意义。细胞凋亡结果显示，与对照组相比，随着 NYZL1短肽浓度的升高， NYZL1作用后的细胞凋亡率无明显差异（P>0.05），NYZL1对BIU-87细胞的周期分布与凋亡结果均无明显影响。
　　4.免疫荧光法鉴定 NYZL1特异性的结果显示，与对照组相比，FITC-NYZL1除了能与 BIU-87细胞结合，还可以和其他膀胱癌细胞结合，且各组间结合率没有明显差异（P>0.05）。
　　5.临床实验结果显示，FITC-NYZL1可以标记膀胱癌患者所有癌变的尿脱落细胞，且随着膀胱肿瘤分期的升高，探针与细胞结合率也升高。对照组探针结合率较低，与实验组间差异有统计学意义（P<0.001）。
　　结论：
　　1.靶向肽NYZL1对膀胱癌细胞增殖、迁移、凋亡和细胞周期生物学行为无明显影响。
　　2.靶向肽NYZL1在膀胱癌细胞表面有特异性结合位点，具有显著的癌细胞靶向性。这一结果为NYZL1的临床应用研究，NYZL1受体的筛选和鉴定提供了参考信息，我们可将NYZL1作为膀胱癌靶向性诊断和治疗的候选分子应用于临床研究。
　　3. FITC-NYZL1分子探针特异性结合膀胱癌细胞，能有效提高尿脱落细胞中膀胱癌细胞的检出率。靶向肽标记的尿脱落细胞有望成为膀胱癌无创诊断和临床监测的新技术，为今后膀胱癌进行早期诊断和药物靶向性治疗研究奠定了理论基础。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

常用缩写词中英文对照表

前言

第一部分 靶向肽NYZL1对膀胱癌细胞生物学行为的影响

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂与仪器

1.2 实验方法

1.3统计学处理

2 结果

2.1 化学合成NYZL1肽

2.2 不同浓度 NYZL1对BIU-87细胞增殖的影响

2.3 多肽NYZL1对BIU-87细胞体外生长的影响

2.4 膀胱肿瘤细胞损伤修复实验结果

2.5 多肽NYZL1对BIU-87细胞周期分布的影响

2.6 多肽NYZL1对BIU-87细胞凋亡的影响

3 讨论

第二部分 膀胱癌靶向肽NYZL1的特异性鉴定

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂与仪器

1.2 实验方法

1.3统计学处理

2 结果

2.1共聚焦显微镜鉴定FITC-NYZL1与膀胱癌细胞结合的特异性

2.2 FITC-NYZL1标记结果

2.3常规尿脱落细胞检查结果

3 讨论

结论

参考文献

综述:导向肽的筛选及在肿瘤中的应用

致谢

在学期间发表的学术论文与研究成果

个人简历