体外间接共培养兔膝关节软骨单位对软骨细胞生物学特性的影响

摘要

目的：
　　通过Transwell间接共培养技术研究兔膝关节软骨单位对软骨细胞生物学特性的影响,为组织工程技术修复损伤软骨选取良好种子细胞提供依据。
　　方法：
　　用不同消化酶将2月龄新西兰兔膝关节软骨分别消化成软骨细胞和软骨单位。按2×105个细胞/孔浓度接种于Transwell双层细胞培养板。实验组：软骨单位接种于上室，软骨细胞接种于下室；对照组：下室接种软骨细胞，上室未接种。分别在2、4、6、8天提取各组Transwell下室软骨细胞进行指标检测。早期凋亡率检测：Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测，TUNEL染色荧光显微镜检测；增殖率检测：PCNA标记流式细胞仪检测，EdU染色荧光显微镜检测；相关基因相对表达量检测：PCR技术检测AGG、Col-II、MMP-13基因相对表达量。
　　结果：
　　Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测Transwell下室软骨细胞早期凋亡率发现，在实验早期（第2、4天）实验组与对照组Transwell下室软骨细胞早期凋亡率差异不明显，差别没有统计学意义（p>0.05）。在实验第6天、第8天实验组软骨细胞早期凋亡率明显低于对照组（P<0.05）。TUNEL染色荧光显微镜检测Transwell下室软骨细胞凋亡率发现，实验组和对照组软骨细胞凋亡率没有显著差异，但有实验组软骨细胞凋亡率低于对照组的趋势。PCNA标记流式细胞仪检测Transwell下室软骨细胞增殖率发现，在实验早期（第2、4天）实验组与对照组Transwell下室软骨细胞增值率差异不明显，差别没有统计学意义（p>0.05）。在实验第6天、第8天实验组软骨细胞增殖率明显高于对照组
　　（P<0.05）。EdU染色荧光显微镜检测Transwell下室软骨细胞增殖率发现，第6天实验组软骨细胞增殖率明显高于对照组（P<0.05）。PCR技术检测Transwell下室软骨细胞相应基因表达量发现，在实验早期（第2、4天）实验组与对照组Transwell下室软骨细胞AGG、Col-II，MMP-13基因表达较为相似，实验组与对照组差异不明显，差别没有统计学意义（P>0.05）。在实验后期AGG、Col-II基因相对表达量在第6天、第8天时实验组明显高于对照组（P<0.05），MMP-13表达量在第8天时对照组明显高于实验组（P<0.05）。
　　结论：
　　1.软骨单位作为关节软骨的基本功能单位，能够更长时间有效抵抗或延缓软骨细胞凋亡、维持软骨细胞增殖及正向调节软骨基质相关物质的基因表达。
　　2.软骨单位有望在组织工程中作为种子细胞用于骨关节炎关节软骨缺损的修复。
　　本实验课题为国家自然科学基金项目“软骨单位力学-生物学分析及其在关节软骨损伤修复中的作用（项目编号：31271033）”的子课题。

目录

声明

前言

1材料与方法

1.1实验所用主要仪器、试剂及动物

1.2 实验方法

1.3统计学方法

2结果

2.1 TUNEL染色荧光显微镜检测软骨细胞凋亡率结果

2.2 Annexin V和7-AAD标记流式细胞仪检测软骨细胞早期凋亡率结果

2.3 PCNA标记流式细胞仪检测软骨细胞增值率结果

2.4 EdU染色荧光显微镜检测软骨细胞增值率结果

2.5 AGG、COL-II、MMP-13基因相对表达量检测结果

3讨论

4结论

参考文献

综述:间充质干细胞在骨关节炎软骨修复中的机制及应用

致谢

个人简历