脂联素对2型糖尿病大鼠骨髓微环境氧化应激水平及骨吸收影响的实验研究

摘要

目的：
　　通过探讨脂联素对2型糖尿病(T2DM)大鼠骨髓中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、骨保护素（OPG）与NF-κB受体活化配体(RANKL)表达水平的影响，结合脂联素对骨髓微环境中糖基化终末产物(AGEs)及晚期氧化蛋白产物（AOPP）的影响，探讨脂联素是否可以通过调节氧化应激水平对糖尿病骨代谢起一定的作用。
　　方法：
　　60只清洁级6周龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组（N组,n=18)及2型糖尿病模型组42只。正常对照组予普通饲料喂养，2型糖尿病模型组先以高脂高糖饲料喂养8周，随后按体重给予以一次性腹腔注射浓度为1％的链脲佐菌素（STZ）30mg/kg，以建立2型糖尿病大鼠模型。于建模成功后，选取造模成功的 SD大鼠36只，随机分为糖尿病组（DM组，n=18）及糖尿病脂联素干预组（APN，n=18）， APN组予皮下注射脂联素10μg/kg·d干预，普通组及糖尿病组大鼠给予等量生理盐水。分别于干预后第4、8、12周末随机选取6只符合标准的大鼠，麻醉后迅速取出双侧股骨及胫骨，提取一侧股骨及胫骨骨髓液，经离心分别留取骨髓细胞及骨髓上清液，另一侧股骨测定骨密度后脱钙包埋切片。ELISA、RT-PCR等方法检测TRAP、RANKL、OPG、AOPP、AGEs，骨组织HE染色观察骨小梁密度。
　　结果：
　　1.随着饲养时间的延长，可见糖尿病组大鼠血糖水平明显升高，而脂联素干预组大鼠血糖水平较糖尿病组大鼠低（P<0.05）。
　　2.随饲养时间延长，正常对照组大鼠骨组织免疫组化表达AGEs水平无明显变化， DM组及APN组大鼠骨组织AGEs逐渐升高；三组间比较表明，4周时，DM组大鼠较N组大鼠AGEs水平明显升高(P<0.05)，脂联素干预后，APN组大鼠较DM组明显减低，8周及12周时，DM组AGEs表达升高更显著（P<0.05），APN干预后较DM组降低（P<0.05），且12周较8周两组间AGEs下降幅度显著增大。
　　3.随着饲养时间延长，N组大鼠骨髓上清液中AOPP无明显变化，TRAP水平逐渐升高，DM组及APN组大鼠AOPP及TRAP水平均逐渐升高；4周时，三组大鼠TRAP表达水平无明显差异，DM组较N组大鼠AOPP水平明显升高（P<0.05）， APN组较DM组无明显差异。8周时，与N组比较，DM组T2DM大鼠AOPP及TRAP水平明显升高（P<0.05），APN组大鼠骨髓上清液 AOPP及 TRAP水平较DM组明显降低（P<0.05），12周时，两组间AOPP及TRAP下降幅度增大（P<0.05）。
　　4.随着喂养时间延长，各组大鼠骨髓细胞中 OPG mRNA表达水平呈逐渐降低趋势，RANKL mRNA表达水平呈逐渐增高趋势。4周时，三组大鼠OPG mRNA、RANKL mRNA表达水平无明显差异，8周时，与N组比较，DM组大鼠骨髓细胞OPG mRNA表达水平显著降低，RANKL mRNA表达水平显著升高(P<0.05)，脂联素干预后，APN组大鼠骨髓细胞OPG mRNA表达水平较DM组明显升高，RANKL mRNA表达水平较 DM组显著降低，12周时，两组间比较变化幅度更加明显。OPG/RANKL值与OPG mRNA表达水平变化趋势一致(P<0.001)。
　　5.随着时间延长，各组大鼠股骨颈 BMD指标均逐渐减低，以 DM组明显；4周时，三组大鼠BMD无明显差异，骨小梁结构尚无明显变化，12周时，DM组较N组BMD水平明显减低，骨小梁破坏严重，APN组较DM组BMD水平明显升高，骨小梁结构有所改善(P<0.001)。
　　结论：
　　1.2型糖尿病大鼠糖代谢紊乱致骨髓微环境中糖基化终末产物生成增多，氧化应激程度加重，可能使2型糖尿病大鼠破骨细胞信号转导通路中OPG/RANKL比值降低，结合TRAP显著升高，表明破骨细胞分化生成增多，可促进骨吸收过程，破坏骨小梁，影响骨质量及骨密度，加速骨丢失。
　　2.外源性脂联素可能通过减少AGEs的生成，使糖尿病大鼠骨髓微环境中氧化应激水平降低，升高OPG表达，抑制RANKL表达，降低2型糖尿病大鼠骨髓中破骨细胞分化，从而对骨代谢起正向的保护作用。

目录

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1主要试剂与仪器设备

1.1 主要试剂

1.2 主要仪器设备

2实验方法

2.1 建立模型，实验分组

2.2 标本采集

2.3 指标检测

3统计学分析

2 结 果

1.一般情况各组间比较

2.三组大鼠骨组织免疫组化AGEs水平比较

3.三组大鼠骨髓上清液AOPP、TRAP水平比较

4.三组大鼠骨髓细胞OPG、RANKL mRNA表达的比较及OPG/RANKL值的比较

5.三组大鼠骨密度BMD及骨小梁结构比较

附表

附图

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述:氧化应激与糖尿病骨质疏松症

致谢

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