尿毒症血清激活NLRP3炎症体信号通路介导平滑肌细胞增殖的机制研究

摘要

目的：
　　体外培养人主动脉平滑肌细胞，明确尿毒症血清可激活 NLRP3炎症体信号通路介导VSMCs增殖，并探索NLRP3抑制剂对VSMCs增殖的抑制作用。
　　方法：
　　收集尿毒症患者及健康人血清，以10％的血清浓度作用于 VSMCs，将实验分为4组：尿毒症血清组（U）、健康血清组（N）、尿毒症血清+格列苯脲组（U+Gli）、健康血清+格列本脲组（N+Gli）。
　　1.VSMCs培养与处理：
　　人主动脉平滑肌细胞（HASMCs）购于美国ATCC公司，用10%尿毒症血清刺激，以健康血清作对照；进一步尝试格列本脲对VSMCs增殖的抑制作用。
　　2. VSMCs NLRP3 mRNA表达水平检测：
　　RT-PCR方法检测NLRP3 mRNA表达量。
　　3.VSMCs NLRP3、Caspase-1活性检测：
　　Western Blots法检测NLRP3、Caspase-1 p20蛋白表达量。
　　4.VSMCs增殖活性检测：
　　使用ELISA检测试剂盒测定溴脱氧尿苷(Brdu)摄取量，通过分析Brdu摄取量来判断VSMCs的增殖活性。
　　结果：
　　与健康血清组比较，尿毒症血清组VSMCs NLRP3 mRNA表达量增多，NLRP3与Caspase-1 p20蛋白表达量也升高，细胞培养上清液中Brdu含量增多，两组对照分析，差别有统计学意义（P<0.05）。而格列本脲处理前后，尿毒症血清组和健康血清组相比较，NLRP3 mRNA、NLRP3蛋白、Caspase-1 p20蛋白表达量均减少， Brdu摄取量也随之减少，差别具有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　尿毒症血清通过激活 NLRP3炎症复合体信号通路，可以促进人主动脉平滑肌细胞增殖，而格列苯脲可通过抑制 NLRP3炎症体活化进而抑制血管平滑肌细胞的增殖。
　　本课题为国家青年科学基金“慢性肾病激活NLRP3炎症体信号通路介导平滑肌细胞增殖参与慢性肾病相关新生内膜增生的机制研究（编号：81400751）”。

目录

声明

常用缩写词中英文对照表

前言

1 材料与方法

1.1实验材料

1.1.1研究对象

1.1.2主要实验试剂及耗材

1.1.3主要实验仪器

1.2主要试剂制备

1.3 实验方法

1.3.1细胞培养及处理

1.3.2 cck-8试剂盒检测细胞生长活力

1.3.3 RT-PCR法检测VSMCs NLRP3 mRNA表达水平

1.3.4 Western bloting法检测VSMCs NLRP3与Caspase-1 p20蛋白表达水平

2 结 果

2.1尿毒症血清及健康人血清血肌酐、尿素氮检测结果

2.2 不同浓度尿毒症血清及健康血清对VSMCs增殖影响

2.3 RT-PCR法检测各组VSMCs NLRP3 mRNA的表达量

2.4 Western blot法检测各组细胞中NLRP3、Caspase-1 p20蛋白的表达

2.5 检测平滑肌细胞增殖活性

3 讨 论

4 结 论

参考文献

综述：NLRP3炎症复合体与肾脏疾病的研究进展

致谢

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