利用精子载体法制备转基因小鼠疾病模型的初步研究

摘要

精子介导基因转移是以精子为载体，在受精时将外源目的基因导入卵母细胞，是目前转基因动物研究中简单而高效的方法学之一。本研究以ICR小白鼠为试验动物，用精子载体法制备转基因小鼠模型，并根据得到的结果分析讨论精子载体法制备转基因动物的可行性及优缺点。 本文进行了如下研究：外源DNA转染小鼠精子的研究：利用DIG末端标记技术和免疫组化技术研究小鼠精子转染外源DNA的效率。试验结果发现，不同小鼠个体精子转染阳性率有明显差异，平均为13％左右。小鼠精子具有自发结合外源DNA能力，结合部位集中在精子顶体后躯，结合的外源DNA首先“挂”在精子膜表面，继而被内化转运到细胞内，但并非所有的结合DNA都被内化。 精子介导法制备转基因小鼠的试验研究：利用考马斯亮蓝染色技术评价小鼠精子顶体反应发生的情况，选择合适的体外受精液。利用小鼠体外受精技术，将体外转染GFP并获能的小鼠精子对成熟卵母细胞进行体外受精，受精卵进行体外培养，荧光显微镜下观察胚胎，结果表达GFP的阳性率为4.7％。试验结果证明了精子介导法制备转基因小鼠的可行性。 乙肝病毒结合蛋白表达载体的构建：利用PCR和基因重组技术构建了HBV结合蛋白表达载体，经过酶切鉴定和基因测序证实了载体序列的正确性，并作为外源DNA准备用于转染小鼠精子制备动物疾病模型。 本研究初步建立了利用精子载体法制备转基因小鼠的平台，为今后制备动物疾病模型奠定了基础。但没有进行HBV结合蛋白基因的转染，今后还需对本试验作进一步的研究。

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