玉米高F值寡肽的制备及生理功能研究

摘要

玉米黄粉蛋白是湿法生产玉米淀粉过程中产生的一种下脚料，含有60％以上蛋白质，由于其口感不佳目前主要应用于饲料，利用价值不高，通过酶解法水解玉米黄粉可制备高F值混合寡肽，高F值混合寡肽具有抗疲劳、解酒、治疗肝性脑病等生物活性。
　　本实验利用耐高温淀粉酶对玉米黄粉进行去淀粉处理，利用单因素实验和响应面实验探究了最佳水解条件为：pH6.0，温度65℃，底物浓度为100 g/L，E/s为110 U/g，作用时间为60 min，在此条件下玉米黄粉中总糖含量减少157.333 mg/g，模型的预期值为154.503 mg/g。
　　实验采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶三种酶复合法水解预处理后的玉米黄粉，制得寡肽混合物。利用自动氨基酸分析仪，分析所制备寡肽混合物中各氨基酸含量，计算F值为28.40。
　　本实验研究了高F值混合寡肽对小麦生长方面的影响。当处理浓度为10μg/mL时，最适合小麦生长。这时小麦叶片的SOD活性比对照组高了9.43%，POD活性高了24.00%， CAT活性高了39.13%。可溶性糖含量高了83.32%。叶绿素a的含量高了118.52%，总叶绿素的含量高了52.63%。小麦植株鲜重重了40.00%，饱和鲜重重了28.03%，干重重了23.81%，相对含水量高了10.65%。说明高F值混合寡肽在一定程度上促进了小麦的增长。
　　本实验将制备的高F值混合寡肽，经SephadexG-25、SephadexG-15、CM Sepharose FF凝胶分离，选取最优的分离方法SephadexG-15凝胶过滤。通过调整柱子的规格、洗脱流速、上样浓度和上样量，最终将高F值混合寡肽分为3个组分P1、P2、P3。测得3种组分的分子量范围2392 u、1516 u、265 u左右。
　　实验对分离得到的三种组分与高F值混合寡肽功能比较发现，组分P3和高F值混合寡肽在醒酒作用及抗疲劳作用的生活指标上没有差异。
　　本实验对组分P3采用高效液相色谱分析，将样品P3用超纯水溶解，12000 r/min离心10 min，取上清；系统：HPLC-U3000；色谱柱：Zorbax SB-C18（4.6×250μm）；进样体积：10μL；平衡缓冲液：5%的乙腈；洗脱缓冲液：5%的乙腈；流速：0.6 mL/min；检测：220 nm。得到两种组分A和B。并通过质谱分析得到组分A和B的一级结构为甘氨酸-缬氨酸-亮氨酸（异亮氨酸）(Gly-Val-Leu(Ile))和甲硫氨酸-亮氨酸（异亮氨酸）(Met-Leu(Ile))。
　　一级结构中存在的亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸为支链氨基酸，具有保肝护肝的作用，据研究表明，甲硫氨酸和甘氨酸同样具有保护肝脏的作用，与实验结果相对应。
　　通过实验为玉米黄粉制备高F值混合寡肽及分离纯化，研究高F值混合寡肽的醒酒、抗疲劳和保肝护肝作用及其对小麦生长的影响提供了实验基础。

目录

声明

主要符号表

第一章 前 言

1.1 高F值混合寡肽的定义

1.2 高F值混合寡肽的制备

1.3 玉米黄粉的来源和组成

1.4 生物活性肽的分离纯化技术

1.5 高F值混合寡肽的生理功能

1.6 展望

第二章 玉米黄粉蛋白的去淀粉处理

2.1 实验材料与仪器设备

2.2 实验方法

2.3 结果与分析

2.4 结论

第三章 玉米高F值寡肽制备及生理功能研究

3.1 玉米高F值混合寡肽对小麦生长影响的实验材料与仪器设备

3.2 高F值寡肽对小麦生长影响的实验方法

3.3 玉米高F值混合寡肽对小麦生长的影响的实验结果

3.4 玉米高F值混合寡肽对小鼠生理功能的影响的的实验材料与仪器设备

3.5 玉米高F值混合寡肽对小鼠生理功能的影响的的实验方法

3.6 玉米高F值混合寡肽对小鼠生理功能影响的结果与分析

3.7 结 论

第四章 凝胶层析法分离高F值混合寡肽及分离组分生理功能研究

4.1 实验材料与仪器设备

4.2 实验方法

4.3 结果与分析

4.4 结论

第五章 高效液相色谱分离组分P3并研究其保肝护肝作用

5.1 实验材料与仪器设备

5.2 实验方法

5.3 结果与分析

5.4 结论

第六章 质谱分析

6.1 实验材料与仪器设备

6.2 实验方法

6.3 结果与分析

6.4 结论

第七章 结论与展望

参考文献

综述:生物活性肽的分离纯化技术研究进展

攻读学位期间取得的研究成果

致谢