抗EGFR治疗提高复发食管癌放疗疗效的动物模型实验

摘要

背景：
　　在我国，食管癌是高发恶性肿瘤，发病率列第三位，死亡率列第四位。食管癌患者确诊时，大多已不能通过手术达到根治治疗，放化疗综合治疗成为食管癌无法手术患者的重要治疗办法。但即使已行放化疗，食管癌局部复发的概率为30-40％。复发后食管癌的治疗成为再程治疗的难题，再治疗效果差，治疗风险大。研究认为是食管癌复发治疗效果不佳的原因可能为：(1)食管组织在已经接受较高照射剂量后，再行局部复发区域的放疗，正常组织耐受性差，放疗剂量无法提高；(2)复发食管癌肿瘤内区域乏氧程度较前增高，对再次放疗抵抗程度增加。研究证明，乏氧区域的肿瘤EGFR基因也出现高表达，所以利用EGFR靶向治疗与放疗的结合，有可能成为治疗复发性食管癌的有效治疗方法。尼妥珠单抗可用来治疗EGFR表达阳性肿瘤的分子靶向药物，目前临床实验证实可与放疗结合治疗食管癌，是目前国际唯一获批治疗食管癌的单抗药物。
　　目的：
　　通过建立动物食管癌复发模型，采用尼妥珠单抗加放疗对复发食管癌模型进行治疗，观察抑制肿瘤生长的情况，确定探讨抗EGFR治疗联合放疗对于复发食管癌的疗效；应用细胞流式技术，免疫组化技术，Western Blot等技术，探讨不同食管癌复发模型乏氧状态和EGFR表达的关系，分析EGFR抑制剂抗肿瘤的作用机制。
　　方法：
　　Western Blot实验检测常氧和乏氧培养下加或不加尼妥珠单抗EC109食管鳞癌细胞中EGFR、p-EGFR和HIF-1α的蛋白表达水平。细胞流式技术检测EC109细胞不同处理方式后的细胞周期和凋亡状态。构建两种食管癌复发肿瘤模型：(1)裸鼠种植肿瘤前24小时行X线照射种植部位10Gy；(2)常规建立裸鼠皮下移植瘤后，照射20Gy待肿瘤再生长，并以常规裸鼠移植瘤模型进行对照。各组裸鼠成瘤并达到入组标准后，每种模型均分为空白对照组、单纯放疗组、尼妥珠单抗组以及尼妥珠单抗联合放疗组4种组，观察测量肿瘤生长曲线。同时采用免疫组化染色分析不同肿瘤模型HIF-1α和EGFR表达情况。采用配对T检验，单因素方差分析进行统计分析。P<0.05为认为差异存在统计学意义。
　　结果：
　　Western Blot分析显示乏氧状态下EC109细胞的HIF-1α、EGFR高表达，应用尼妥珠单抗可下调p-EGFR的表达。流式细胞分析显示尼妥珠单抗联合放疗组将细胞主要阻滞在细胞周期G2、细胞凋亡比率最高。肿瘤组织免疫组化染色证实复发模型肿瘤HIF-1α表达增加，细胞膜上EGFR的表达亦明显增高。肿瘤生长延迟实验证实，放射治疗均可抑制肿瘤生长，单纯尼妥珠单抗治疗与空白对照组没有明显差异；复发食管癌肿瘤生长速度与常规模型相比生长较慢，尼妥珠单抗联合放疗治疗组肿瘤生长明显延迟，P＜0.05。
　　结论：
　　细胞实验证实，食管癌细胞乏氧程度增加， EGFR表达程度亦增加，而尼妥珠单抗可下调p-EGFR表达。对于EGFR高表达的复发性食管肿瘤，尼妥珠单抗可以提高放射治疗敏感性，明显改善复发性食管癌的放疗疗效。本实验为临床上复发食管癌治疗提供新思路，为尼妥珠单抗用于提高复发性食管癌放疗疗效的作用，提供了理论和实验依据。

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第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1 材料

2.2 实验方法

2.3 统计学分析

第三章 结 果

3.1 尼妥珠单抗对EC109细胞周期的影响

3.2 尼妥珠单抗对EC109细胞凋亡的影响

3.3 Western Blot结果

3.4 病理结果

3.5 肿瘤生长延迟实验

第四章 讨 论

4.1 EGFR抑制剂与食管癌放射治疗

4.2 EGFR的表达与肿瘤细胞放射敏感性的关系

4.3 EGFR抑制剂提高放疗疗效的机制探讨

4.4肿瘤的乏氧与放射治疗的抵抗

4.5肿瘤乏氧与EGFR过表达的关系

4.6 临床应用价值

第五章 结 论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢