首页> 中文学位 >褐藻胶生物转化的分子生物学基础研究Ⅰ:褐藻胶裂解酶新基因的克隆、重组表达与重组酶的初步分析;Ⅱ:假单胞菌褐藻胶生物合成操纵元全基因的克隆与序列的分析
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褐藻胶生物转化的分子生物学基础研究Ⅰ:褐藻胶裂解酶新基因的克隆、重组表达与重组酶的初步分析;Ⅱ:假单胞菌褐藻胶生物合成操纵元全基因的克隆与序列的分析

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第一章引言

1.褐藻胶多糖和低聚糖的生物学活性研究

1.1褐藻胶多糖及生物活性物质的研究

1.2褐藻胶低聚糖及其生物学活性的研究

2.褐藻胶裂解酶及其分子生物学研究

2.1褐藻胶裂解酶

2.2褐藻胶裂解酶基因的克隆与功能鉴定研究

2.3褐藻胶裂解酶的构-效关系研究

3.褐藻胶的微生物合成及其分子生物学研究

3.1细菌合成褐藻胶的遗传学基础

3.2细菌中褐藻胶的生物合成途径

4.褐藻胶的生物转化

4.1酶法制备褐藻胶低聚糖

4.2微生物生物合成与修饰的研究

第二章褐藻胶裂解酶新基因克隆、序列分析和重组酶的表达、纯化与性质的初步研究

1.实验材料

2.实验方法

2.1海水环境基因组DNA质粒文库的构建

2.2褐藻胶裂解酶新基因(a/gL)的筛选

2.3阳性克隆D45中外源基因片段的序列分析

2.4 algL基因的重组、表达和纯化

2.5重组褐藻胶裂解酶的初步鉴定

3实验结果

3.1褐藻胶裂解酶基因的生物信息学分析与简并PCR引物

3.2海水环境基因组DNA基因文库的构建和96孔板法筛选

3.3重组质粒pD45的酶切鉴定与序列分析

3.4 algL基因和AlgL蛋白的序列分析

3.5 pLyase-A重组菌诱导表达条件的优化

3.6含His-标签AlgL的大量表达和纯化

3.7蛋白质浓度的测定

3.8己糖醛酸浓度的测定

3.9 AlgL活性的紫外吸收法测定

3.10 AlgL底物特性的PAGE分析

4讨论

4.1实验的技术路线

4.2海水环境基因组DNA质粒文库的构建

4.3 algL基因的筛选

4.4阳性克隆D45外源基因的序列分析

4.5重组AlgL的表达、纯化

4.6重组AlgL活性的分析

第三章:海洋假单胞细菌的筛选、16S rRNA鉴定和褐藻胶生物合成操纵元基因全序列的克隆与序列的分析

1.实验材料

2.实验方法

2.1 algL基因来源菌株的筛选和鉴定

2.2褐藻胶生物合成操纵元基因全序列的克隆与序列分析

3.结果与分析

3.1海洋微生物的筛选

3.2菌株的基本特征

3.3 16S rDNA序列与系统发育树

3.4操纵元全基因序列的克隆

3.5全操纵元基因序列的分析

3.6操纵元5'-调控区DNA序列的分析

4.讨论

4.1微生物的筛选策略

4.2菌种的16S rDNA鉴定

4.3操纵元序列特征的分析

4.4操纵元的转录机制分析

总结与展望

参考文献

致谢

发表文章情况

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摘要

该论文以环境总基因组DNA为研究切入点,首先构建了海水环境基因组DNA文库,在对己知褐藻胶裂解酶序列进行生物信息学分析的基础上设计了简并引物,建立了一个简便而有效的褐藻胶裂解酶基因PCR筛选法.通过该方法筛选得到一条褐藻胶裂解酶新基因,重组酶具有polyM-底物专一性.该研究为实现褐藻胶的酶法降解奠定了基础.该论文以该algL基因为研究切入点,从海水中筛选得到一株高产褐藻胶的海洋假单胞细菌,克隆了褐藻胶生物合成操纵元基因的全序列,进行了生物信息学分析.由于细菌褐藻胶生物合成途径已经比较清晰,该操纵元全序列的克隆和分析,为利用DNA重组技术改建细菌固有的褐藻胶生物合成途径、获得新型褐藻胶多糖或者寡糖、实现褐藻胶的生物转化奠定了分子生物学研究的基础.

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