蜡状芽孢杆菌S-12-86产海洋溶菌酶的研究

摘要

通过添加金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的平板,从东海海泥中筛选出一株产溶菌酶能力较高的细菌菌株S-12,其产生的溶菌酶对卵清溶菌酶不能作用的多种致病菌有较强的溶解活性,溶菌谱广泛.对它的形态特征、培养特性进行了观察,结合16SrDNA全序列分析,将该菌株鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)以蜡状芽孢杆菌S-12为出发菌,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体,对原生质体进行紫外、亚硝基胍复合诱变,对大量再生突变株进行筛选,最终获得了高产、稳定的溶菌酶产生菌株S-12-86,在非海水而是自来水配制的培养基中就能够大量产酶,产酶活力为270U/ml.从而解决了蜡状芽孢杆菌S-12-86低温溶菌酶大规模工业化生产设备和产业化区域的局限性.以产低温溶菌酶的蜡状芽孢杆菌S-12突变株S-12-86为培养菌株,进行碳源、氮源、起始pH值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验.实验结果证明在以糊精2﹪、花生粕2﹪为碳源,以NH<,4>CL 1﹪、(NH<,4>)<,2>SO<,4> 1﹪.为氮源,起始pH值7,接种20h种龄的种子6﹪,25℃、250r/min的条件下在旋转摇床中培养27h,菌株产酶活性最高.论述了护肤化妆品中海洋溶菌酶的理化性质、防腐效果及其与常规护肤化妆品主要原料、表面活性剂的配伍性.该酶对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH为8,在低温条件下还能保持较高活性,且广谱杀菌,对常见细菌、真菌均有作用.酶的抑制性实验和配伍性实验表明:该酶在温度45℃以下、pH4~10范围内均具有良好的稳定性,受日化产品中常见金属离子影响小,与护肤化妆品中常规成分配伍性良好.

目录

摘要

ABSTRACT

第一章引言

第一节酶制剂研制的国内外进展

第二节溶菌酶国内外研究进展

第三节芽孢杆菌产生溶菌酶的研究进展

参考文献

第二章产溶菌酶海洋细菌的筛选和鉴定

第三章产溶菌酶高产菌株复合诱变原生质体选育

第四章溶菌酶产生菌产酶发酵条件的优化

第五章海洋溶菌酶酶学性质及其在护肤化妆品、消毒洗涤产品中的应用

研究展望

致谢