人/鲑降钙素嵌合基因在大肠杆菌中的串联表达

摘要

降钙素(Calcitonin，CT)是一种由32个氨基酸残基组成的多肽类激素，它广泛存在于哺乳动物的甲状腺和鱼类的后腮体中，其主要生理功能是参与体内的钙磷代谢，通过抑制破骨细胞的活性，促进钙在骨中的沉淀，从而降低血钙含量。天然降钙素中鲑鱼降钙素(sCT)的活性最高，约为人降钙素(hCT)的40倍。目前，鲑鱼降钙素已被广泛应用于临床。 为保证降钙素生物活性的同时尽量降低其在人体内的抗原性，本实验室人工合成了新型人/鲑降钙素嵌合基因(己申请专利)。为提高表达量，我们采用串联表达的方法。首先设计一小段柔性连接肽，经过SWISS-MODEL与3D-PSSM蛋白质结构预测，通过此短肽首尾相接的串联CT中降钙素的活性位点和抗原位点均可以得到充分暴露。因此，我们用同尾酶法构建了多拷贝串联基因表达质粒pLEX-nCT(n=1，2，3，4，5)(每段CT基因之间以编码连接肽的DNA连接)，并导入大肠杆菌GI724中表达。表达产物经SDS-PAGE检测，1-5拷贝串联CT基因的表达均不明显。Westernblotting检测结果显示，串联CT具有人源降钙素的抗原性。本工作为降钙素基因工程的进一步研究和应用提供了实验基础。

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述和立项依据

第一节降钙素的研究概况

1降钙素概述

2降钙素的生物活性

3降钙素的分子结构与生物活性

4降钙素的临床应用

5降钙素的分子生物学研究

第二节研究课题的提出及立项依据

第二章人/鲑降钙素嵌合基因的串联表达

第一节人/鲑降钙素嵌合基因的合成

1材料和方法

2结果

3讨论

第二节柔性连接肽的设计

1方法

2结果与讨论

第三节人/鲑降钙素嵌合基因的串联表达

1材料和方法

2结果

3讨论

总结

参考文献

致谢

论文发表情况