皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai）外套膜耐维生素E缺乏消减cDNA文库的构建及相关基因的克隆

摘要

本文利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization， SSH)来构建消减文库的方法，克隆维生素E缺乏时皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)外套膜差异性表达的基因。我们选取了片段大小不同的48个克隆测序，其中有16个新基因，10个谷胱甘肽转移酶的基因，5个谷胱甘肽过氧化物酶基因，2个过氧化氢酶基因，3个羟基类固醇脱氢酶基因，4个酪氨酸激酶基因，1个类甲状腺过氧化物酶蛋白基因，3个纤维素酶基因，1个cAMP效应元件结合蛋白基因，3个贝壳生物矿化相关蛋白的基因。并在此基础上，对外套膜消减文库中所得到的与过氧化酶相关的两个基因，类纤维素基因、类钙结合蛋白基因以及两个贝壳蛋白基因的片段，利用RACE技术获得了与过氧化酶相关的两个基因和类钙结合蛋白基因的全长，并获得了类纤维素基因的5’产物和两个贝壳蛋白基因的3’产物，为进一步研究这些基因在不同维生素水平和不同组织中的表达情况奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一部分文献综述

第二部分实验材料与方法

2.1.实验材料来源

2.1.1实验动物的饲养

2.1.2样品的采集和处理

2.2消减cDNA文库的构建

2.1.1大体流程

2.2.2实验步骤

2.3.RACE获取全长

2.4.RT-PCR

第三部分实验结果

3.1.构建cDNA消减文库的结果

3.2.RACE获取基因全长的结果

3.3.RT-PCR分析

第四部分讨论

参考文献

附录

致谢

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