海产动物来源n-3PUFA磷脂的提取及生物活性研究

摘要

目前我国水产品产量已占世界总产量的三分之一左右，位居世界第一位，但加工和综合利用方面与世界水平相比差距还十分明显。近年来，我国水产加工业的产业结构正逐步发生变化，由过去的初步加工、粗加工向精深加工方向发展，且追求多样化、系列化和高附加值的产品。 太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)产量每年居于我国养殖贝类前列，却尚无好的精深加工利用方式；加工后得到的虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)生殖腺、鸢乌贼(Sthenoteuthis oualaniensis)卵和阿拉斯加狭鳕(Theragra chatcogramma)鱼卵目前也得不到充分的综合利用。如何充分挖掘这类海产动物原料的价值，提高其综合利用率，得到高附加值，高科技含量的产品，一直是亟待解决的问题。海产动物中富含EPA(二十碳五烯酸)、DHA(二十二碳六烯酸)等n-3系列不饱和脂肪酸(n-3PUFA)，贝类和鱼卵又是含丰富磷脂的原料，因而从上述海产动物原料中开发n-3 PUFA磷脂是一个很值得研究的方向。 首先本文以太平洋牡蛎、虾夷扇贝生殖腺、鸢乌贼卵和阿拉斯加狭鳕鱼卵等海产动物原料为研究对象，提取其中的总脂肪，分析其中的脂质组成和总胆固醇含量，检测各脂质中的脂肪酸组成，并建立了对于海产动物来源磷脂的灵敏、精确的HPLC-ELSD检测分析方法。发现鸢乌贼卵、鳕鱼卵磷脂中含大量PC，论证了以两者为原料，大量获取以DHA-PC、EPA-PC为主要功能成分的DHA/EPA磷脂的提取工艺的可行性。 其次，采用鸢卵粉为原料，用超临界CO2萃取工艺对其中胆固醇进行脱除后用乙醇浸提，并将工艺进行了优化和放大实验，最后得到的提取工艺提取效果好，得到的磷脂产物产量高，纯度好，胆固醇含量低，而且整个工艺过程无任何有毒有害的溶剂残留或污染，绿色环保，有着较高的生产应用价值。对得到的DHA磷脂产物分析，发现其磷脂含量达85％以上，PC含量达60％以上，脂肪酸组成中DHA含量达30％以上。 再次，对DHA磷脂产物中的PC的脂肪酸组成情况进行了分析，发现DHA含量达40％，证明其中富含DHA-PC；利用磷脂酶A1对DHA-PC进行酶法降解得到2-DHA-LPC产物，其脂肪酸组成中DHA含量达50％，证明DHA-PC中的DHA以结合在Sn-2上为主，即以2-DHA-PC为主。 最后，将DHA磷脂产物制成脂质体，采用灌胃荷S180肉瘤小鼠的方法研究了其抗肿瘤活性及对免疫功能的调节作用。实验结果表明DHA磷脂脂质体具有抑制肿瘤生长的作用，而且能全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能。推测其通过增强T细胞、B细胞和巨噬细胞等的功能以抑制肿瘤细胞的生长。分析认为DHA磷脂脂质体提高机体的免疫能力和其抗肿瘤作用主要是通过PC和DHA两种活性物质来实现的，并且克服了DHA单独存在时易被氧化的缺点，制备成脂质体的形式显现更好的生理活性。2-DHA-PC为主要功能成分的DHA磷脂具有广阔的医药和保健品的开发前景。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：本文所用缩略语

声明

前言

0.1海产动物来源脂质研究现状

0.2磷脂概述

0.2.1磷脂的研究历史

0.2.2磷脂的结构和分类

0.2.3理化性质

0.3磷脂的来源及生理功能

0.3.1磷脂的来源

0.3.2磷脂的生理功能

0.3.3 DHA/EPA磷脂的生理功能

0.4磷脂的应用和发展现状

0.4.1磷脂的应用

0.4.2磷脂生产发展现状

0.5磷脂组分的分析检测方法研究进展

0.5.1 TLC法

0.5.2 HPLC法

0.5.3其它方法

0.6磷脂分离提取研究进展

0.6.1溶剂萃取法

0.6.2超临界流体萃取法

0.6.3吸附色谱法

0.6.4膜分离法

0.7本论文立题依据和研究内容

第一章几种海产动物原料中脂质含量及其脂肪酸组成分析

引言

1.试验材料与仪器

1.1化学试剂与材料

1.2主要设备仪器

2试验方法

2.1原料预处理

2.2水分含量测定

2.3总脂肪含量测定

2.4胆固醇含量测定

2.5总脂肪组分分离测定

2.6脂肪酸组成分析

3结果与讨论

3.1水分含量测定

3.2脂肪含量及组成

3.3脂肪酸组成分析结果

本章小结

第二章几种海产动物原料中磷脂组成的HPLC-ELSD分析

引言

1试验材料与仪器

1.1化学试剂与材料

1.2主要设备仪器

2试验方法

2.1HPLC-ELSD分析条件选择

2.2样品配制

2.3进样分析

3结果与讨论

3.1磷脂标准曲线

3.2磷脂标准混合与磷脂样品的色谱图

3.3HPLC-ELSD分析精密度

3.4海产动物来源磷脂样品分析

本章小结

第三章DHA磷脂产品制备工艺研究

第一节原料选择

引言

1试验材料与仪器

2试验方法

3结果与讨论

第二节乙醇浸提鸢卵粉工艺研究

引言

1试验材料与仪器

2试验方法

3结果与讨论

第三节超临界CO2法脱除鸢卵粉胆固醇工艺优化

引言

1试验材料与仪器

2试验方法

3结果与讨论

本章小结

第四章DBA产物中PC的脂肪酸组成特点

第一节DBA磷脂产物中PC的脂肪酸组成分析

引言

1.试验材料与仪器

2试验方法

3结果与讨论

第二节DHA-PC Sn-2位脂肪酸组成分析

引言

1试验材料与仪器

2试验方法

3结果与讨论

本章小结

第五章DHA磷脂的抗肿瘤及免疫调节作用研究

引言

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1对荷瘤小鼠S180肉瘤生长、和胸腺指数的影响

2.2对体重和免疫器官重量的影响

2.3对荷瘤小鼠血清溶血素含量的影响

2.4对荷瘤小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响

2.5对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响

3结论

本章小结

创新

参考文献

附录

发表论文情况

致谢