3种重要经济头足类微卫星标记的分离及特性研究

摘要

长蛸(Octopus minor)、真蛸(Octopus vulgaris)、莱氏拟乌贼(Sepioteuthislessoniana)是经济头足类,其肉嫩味美、营养丰富,是深受世界各地人们喜爱的美食。近年来,生存环境的破坏、过度捕捞等使其自然资源遭到破坏。因此,开展种群遗传结构调查对其资源保护具有极其重要的意义。微卫星标记以其共显性,高多态性等特点成为研究遗传结构和生物进化的有力工具。本研究应用磁珠选择法从基因组中分离了3种头足类的微卫星位点,共获得微卫星序列230条,分析其多态性,并向GenBank提交微卫星序列53条。
　　目前,头足类中微卫星位点的开发工作还处在起步阶段,长蛸、莱氏拟乌贼的微卫星位点未见报道,而真蛸也只有Greatorex等(2000)开发的6个位点,这远不能满足头足类种质资源调查和遗传多样性研究的需要。本实验采集山东荣成(37.16°N,122.41°E)的长蛸,福建霞浦(26.89°N,120.00°E)的真蛸,海南陵水(18.48°N,110.02°E)的莱氏拟乌贼野生个体,应用磁珠杂交富集法进行了微卫星位点的分离。从长蛸富集文库中PCR筛选625个菌落,挑取115个克隆测序,最后设计了50对引物,经聚丙烯酰胺凝胶检测获得12个多态性微卫星位点;筛选真蛸250个菌落,挑取70个克隆测序,设计55对引物,最后筛选出17个多态性位点;挑取360个莱氏拟乌贼菌落进行PCR筛选,送97个克隆测序,共设计引物52对,24个位点具有多态性。
　　采集野生群体检测其多态性,等位基因数目、观测杂合度、期望杂合度等参数被用来评估每个位点的多态性水平。长蛸12个位点中,等位基因数为2-11,平均值为5.4;观测杂合度为0.200-1.000,平均0.635;期望杂合度为0.235-0.869,平均0.630。真蛸17个位点中,等位基因数位3-17,平均值为8.5;观测杂合度0.154-1.000,平均0.809;期望杂合度为0.214-0.925,平均0.750。莱氏拟乌贼24个位点,等位基因数为4-26,平均13.25;观测杂合度为0.188-0.828,平均0.675;期望杂合度为0.392-0.921,平均0.852。这些位点将成为调查3种头足类种群遗传结构的有力工具。