饥饿对金鱼雌鱼卵巢发育以及性腺型和脑型芳香化酶基因表达的影响

摘要

金鱼（Carassius auratus Vat.），属于鲤科(Cyprinidae)，鲤亚科(Cyprininae)，鲫属(Carassius)，是鲫(Carassius auratus)的变种。本文以金鱼作为实验对象，运用组织学、免疫组织化学以及分子生物学方法，研究金鱼雌鱼芳香化酶在各组织中表达情况，和饥饿胁迫条件下金鱼雌鱼的卵巢发育，并深入分析了性腺型、脑型芳香化酶CYP19A、CYP19B基因的表达情况，所得结果及结论如下。 1饥饿对金鱼卵巢发育的影响金鱼的卵巢分为左右两叶，部分不对称，紧贴体腔上部，约占体腔的20％～50％。取样时期的金鱼卵巢中存在多个不同时相的卵母细胞，以第2时相第3时相和第4时相居多，证明了金鱼卵巢中卵母细胞发育的不同步性，属产卵期长、多次产卵鱼类。在对其进行不同时间长度的饥饿处理后发现:短期饥饿(5d)，卵巢发育情况与对照组同期相比无明显差别，甚至比对照组的卵巢发育情况偏好;而经过较长期的饥饿(10～15d)后，卵巢中发育较成熟的卵母细胞（卵黄囊较丰富的第3时相和第4时相卵母细胞）细胞膜破裂，卵黄囊开始分解，越到后期，这种分解越剧烈，卵巢中残存着部分已被分解的卵母细胞，卵黄囊未发育的第2时相卵母细胞分解较少。通过对性成熟系数的测定，发现对照组四个数据组内比较以及饥饿组三个数据比较，性成熟系数起伏无显著差异，而且标准偏差较大，说明在短期(15d)内，金鱼性成熟系数不太稳定，个体差异较大，同一批鱼的性腺发育存在不同步性。同时期对照组和饥饿组组间比较，饥饿5d到10d，性成熟系数下降，可能与饥饿期间卵巢长时间得不到外源性营养物质供给使卵巢重量减轻有关;第15d，性成熟系数反而出现上升，这可能是因为长时间的饥饿造成体重的下降幅度超过性腺重量下降的幅度。 2雌性金鱼各组织芳香化酶的免疫组织化学定位通过免疫组织化学方法，采用兔抗人芳香化酶作为一抗对金鱼的12个组织进行免疫组织化学检测，旨在揭示芳香化酶在金鱼体内的分布特点，以探究芳香化酶在体内发挥的主要生理作用及其机制。实验结果发现金鱼的芳香化酶存在于被检测的所有组织:卵巢、脑、垂体、肝脏、肠、心、脾、头肾、肾和鳃，具有广泛分布性。这说明芳香化酶的功能部位也十分广泛。在卵巢分布的芳香化酶可能参与卵黄的积累和卵母细胞的发育。脑和垂体的芳香化酶参与雄激素合成雌激素的过程。肝脏的芳香化酶可能参与卵黄蛋白原的合成。 3饥饿对金鱼雌鱼性腺型和脑型芳香化酶基因（CYP19A和CYP19B）表达的影响通过已经克隆得到的金鱼性腺型芳香化酶基因，运用半定量RT-PCR技术，对雌性金鱼的P450aromA和P450aromB的mRNA在不同组织的表达，以及同一组织在不同饥饿胁迫条件下的表达进行研究。从组织的差异性表达结果发现，CYP19A基因在金鱼的卵巢、脑、肝脏、肠、心、脾、头肾、肾、鳃和肌肉10个组织中都有表达,但只是表达量有所差异:性腺中表达最丰富，心脏中最少;CYP19B基因在肌肉、脑、心、头肾、脾和性腺中存在表达，表达量也有差异:脑中表达最丰富，其余依次为:头肾、性腺、脾、肌肉和心。经过饥饿处理后，对性腺和脑组织的表达分析显示，CYP19A基因在脑和性腺中的表达规律相似:饥饿5d时表达量显著降低至较低的水平，饥饿期间，表达水平无显著差异。CYP19B基因在脑的表达规律:饥饿5d时表达量显著降低至较低的水平，饥饿期间，表达水平无显著差异。CYP19B基因在性腺的表达规律:饥饿5d时表达量显著降低至较低的水平;饥饿10d到15d，表达水平显著上升，但仍然显著低于对照组水平。这说明雌鱼在饥饿条件下，雌激素合成量降低，卵巢发育缓慢甚至停滞，以度过饥饿期。

目录

声明

摘要

前言

第一章 文献综述

1 鱼类卵巢研究

2 鱼类芳香化酶研究

3 鱼类饥饿生理的研究

第二章 饥饿对金鱼卵巢发育的影响

1 材料与方法

2 结果

2．1 金鱼卵巢外观

2．2 金鱼卵巢的苏木精-曙红(H．E)染色观察

2．3 金鱼的性成熟系数(GSI)测定

3 讨论

4 小结

第三章 雌性金鱼各组织芳香化酶的免疫组织化学定位

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第四章 饥饿对金鱼雌鱼性腺型和脑型芳香化酶基因(CYP19A和CYP19B)表达的影响

1 材料与方法

2 结果

2．1 雌性金鱼CYP19A基因的组织表达

2．2 饥饿对雌性金鱼CYP19A基因在脑和卵巢中表达的影响

2．3 雌性金鱼CYP19B基因的组织表达

2．4 饥饿对雌性金鱼CYP19B基因在脑和卵巢中表达的影响

3 讨论

4 小结

参考文献

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