卵型芳香化酶基因在鮸鱼卵巢发育过程中的表达模式研究

摘要

细胞色素芳香化酶P450是催化雌二醇合成的关键酶，能使得雄激素向雌激素转化，该基因在雄性性腺的检测表达却相对较低。我们使用芳香化酶抑制剂能抑制芳香化酶的表达。在鱼类的实验研究中我们发现的两种基因编码的p450arom，它们分别是大量表白于性腺和脑。这两种芳香化酶都具有特异性的启动因子，表达受不同调节因子的调控。在胚胎发育过程中:我们检测到不同的时空表达，具有独特的功能。在芳香化酶反应过程中，P450芳香化酶起着主要的作用。所以我们认为，开展芳香化酶的研究具有重要意义。　　哺乳动物中，卵巢芳香化酶主要在卵泡的颗粒细胞中，催化激素与颗粒细胞的受体结合，使得颗粒细胞逐渐增长，并不断合成芳香化酶。研究发现颗粒细胞自身并不能合成雄性激素，这一反应是黄体生成素和内膜细胞结合，促得使细胞将乙酸和胆固醇转变为雄烯二酮，雄烯二酮再经扩散作用进入颗粒细胞，最后在颗粒细胞内被芳香化，从而形成雌性雌性激素被分泌到卵泡和血液中，进而达到促使卵泡发育的作用。在对鮸鱼的实验研究中，我们发现，芳香化酶在2-3月的鮸鱼体内能够检测到芳香化酶的时空表达，在其血液中也可以检测到雌二醇，这表明鮸鱼在性腺发育的早期已经初步具备类固醇合成聚合能力。并且我们发现芳香化酶的活性在鮸鱼体内的随着卵巢的发育而不断得到增强。它催化雄性激素向雌性激素转化。　　综上所述，我们认为鮸鱼卵型芳香化酶在卵巢发育过程中能够促进卵细胞中卵黄的生成和积累，使得卵子的发育能够正常进行，其对娩鱼卵巢发育有重要作用。

目录

声明

摘要

缩略用语及中英文对照表

第一章 文献综述

1-2 鱼类卵巢的组织学分期

1-3 自然条件下的鱼类性别逆转

1-4 基因与鱼类性别

1-5 人为手段改变鱼类的性别

1-6 采取人为手段的意义

1-7 芳香化酶基因介绍

1-8 芳香化酶基因的特点

1-9 芳香化酶在鱼卵巢发育中的表达状况研究

1-10 芳香化酶在水产中的应用概述

1-11 研究目标和拟解决的关键问题

第二章 材料方法与实验设计

2-1 仪器和设备

2-2 试剂与试剂盒

2-3 主要试剂和酶

2-4 实验材料

2-5-2 提取基因组DNA(苯酚氯仿法)

2-5-3 质粒DNA的提取

2-5-4 序列分析

2-5-6 感受态制作与质粒转化

2-5-7 目的基因在大肠杆菌中的表达

2-5-9 提取RNA和合成SMART cDNA

2-5-11 克隆鮸鱼cyp19a1a启动子

第三章 实验结果及分析

3-1 氨基酸序列比较和系统发育分析

3-2 多克隆抗血清制备和Westerm印迹分析

3-3 鮸鱼免疫组织化学定位和定量cyp19a1a在卵巢中的表达

3-4 鮸鱼体内cyp19a1a启动子在斑马鱼中的表达分析

第四章 讨论

4-1 芳香化酶基因具有保守性

4-2 鮸鱼芳香化酶基因表达具有组织细胞特异性

4-4 总结

参考文献

致谢

在读期间发表的学术论文及研究成果