不同猪脏器来源糖胺聚糖的提取及结构分析

摘要

糖胺聚糖是蛋白聚糖中聚糖部分的总称,能调节多种生长因子信号通路。糖胺聚糖通过与蛋白相互作用在发育、保健和疾病中扮演多个角色。猪是药用糖胺聚糖最常见来源之一,但是目前对于比较不同猪脏器组织来源的糖胺聚糖研究甚少。因此,本论文主要目的在于六种不同猪组织的糖胺聚糖提取分离比较,以及不同组织来源的糖胺聚糖组分、含量、结构的比较研究。
　　本文以猪脏器组织(猪心、猪肝、猪小肠、猪肺、猪肾、猪小肠粘膜)为原料,分别用丙酮和甲醇/氯仿脱脂后,用工业蛋白酶分别在时间为4h和16h的条件下进行提取,用工业树脂吸附法和醇沉法最后将粗多糖分离出来,产率分别为:H4:0.41％;H16:0.43%;Li4:1.2%;Li16:1.05%;Si4:0.52%;Si16:0.55%;Lu4:0.46%;Lu16:0.57%;K4:0.79%;K16:0.39%。表明在相同提取条件下,不同组织来源的糖胺聚糖提取率有所不同,在不同酶解时间下糖胺聚糖的提取率差异也各不相同。
　　本文以醋酸纤维素薄膜电泳,硫酸-咔唑法,阿利新蓝法和高效液相色谱法对粗多糖样品进行了初步分析,其中糖胺聚糖含量最高的是 H16样品,最低的是Li4样品,糖醛酸含量最高的是Lu4h,含量最低的是Li4h。由于肝素和硫酸乙酰肝素中含有N-乙酰葡萄糖胺,硫酸软骨素和硫酸皮肤素中含有N-乙酰半乳糖胺,因此glcN/galN可以代表HP;HS/CS;DS。通过高效液相色谱法分析得出了糖胺聚糖的各单糖组分可以发现除了小肠之外,其余样品16h的 HP;HS/CS;DS的比值均有降低,表明随着反应时间的延长,主要是内脏组织中的硫酸软骨素和硫酸皮肤素被提取出来。
　　本文用高效液相色谱质谱联用(LC-MS)法检测样品中的二糖,分别检测了从六种不同猪组织中提取的糖胺聚糖的二糖组成,成功检测到了传统检测方法检测不到的艾杜糖醛酸和葡萄糖醛酸。

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第一章 前言

1.糖胺聚糖和蛋白聚糖概述

2.糖胺聚糖的生物合成

3糖胺聚糖与蛋白的相互作用

4.本研究的目的意义

第二章 猪内脏组织和猪小肠粘膜粗多糖的提取分离纯化

1材料和仪器

2实验方法

3 实验结果

4本章小结

第三章 猪内脏组织粗多糖理化性质研究

1材料和仪器

2实验方法

3猪内脏组织粗多糖理化性质测定结果

4单糖组成的测定结果

5本章小结

第四章 猪内脏组织和猪小肠粘膜粗多糖的二糖分析研究

1材料和仪器

2实验方法

3结果

4本章小结

结语

参考文献