长蛸饵料分子学鉴定与人工繁育研究

摘要

长蛸(Octopus minor)广泛分布于我国南北沿海，为习见头足类，也是我国北方重要的出口经济蛸类。近年来，由于环境恶化和过度捕捞，长蛸的渔获量日益下降，开展长蛸繁育生物学和养殖技术研究具有现实意义。
　　本文以长蛸为研究对象，研究了基础生物学和人工繁育技术，包括长蛸性成熟期间的饵料种类分子学鉴定、多雄交配策略研究、受精卵采集与孵化以及幼体培育等，旨在为长蛸增养殖、种质资源保护与合理开发提供理论技术支撑。主要研究结果如下:
　　1.长蛸性成熟期间饵料分子学鉴定
　　2014年4-7月每月中旬，在山东荣成月湖分别采捕雄雌长蛸各20-25只。经解剖测量与组织学观察，结果发现:4月份雄性已性成熟，雌性处于卵黄合成期，性腺指数从0.010（4月份）显著上升至0.106（7月份）;各月份雄性体重均大于雌性，雌雄体重在4、5月份间和6、7月份间差异不明显，然而在5到6月份之间都有明显的增长(P＜0.05)，平均体重分别由117.29g、192.4g增加到128.68g、202.88g;除去性腺和消化系统剩余组织重量的变化趋势与体重一致;雌雄个体的内脏团重没有明显变化;雌性每月平均食糜重均大于雄性食糜重，雌雄两组空胃率平均为50％和73.26％，表明雌性个体在4-7月份的摄食强度高于雄性个体。
　　采用DNA条形码技术扩增了长蛸胃含物mtCOI序列，成功率达87.88％，扩增片段在556-708bp。分析结果显示胃含物中最多的种类是黄鳍刺虾虎鱼(占31.03％)，其次是矛尾复虾虎鱼(12.07％)，其余的种类占18.97％，分别为粗棘云鳚，纹縞虾虎鱼，巢沙蚕，短脊鼓虾，口虾蛄，日本蟳等6个种类。同时，在胃含物饵料组成的鉴定中还鉴定出了一种寄生虫外和长蛸本物种，并对长蛸残食进行了分析。
　　2.长蛸多雄交配策略研究
　　2012年6-8月份在山东荣成月湖采捕雌蛸亲体暂养于室内产卵。待到胚胎发育到红眼期开始取样。选取10个家系(B1-B10):每个家系中包括15个子代以及对应的母本肌肉。选用已开发的微卫星位点OM02，OM03，OM04，OM05，OM07和OM08对所有个体进行扩增。由于OM02位点含有无效等位基因、多样性低以及与位点OM05连锁不平衡等原因，使用其余5对微卫星引物进行长蛸多雄交配策略的分子学鉴定。结果显示:10组家系中6组具多父性（占到60％）;使用GERUD计算结果显示家系中子代共享最小父本数为1-3个，父本的基因型都不同;家系B2、B3、B4和B9中子代共享一个父本，其余家系具有多父性。多父家系中有4组（占多父组66.7％）出现显著的繁殖偏歧，并且在这4家系中存在一个父本的子代占到组中子代总数的50％以上，这表明长蛸存在精子竞争现象或是雌性亲本有选择精子的现象。
　　3.长蛸孵化与幼体培育
　　本节改进了之前的采卵器，并进行了长蛸幼体的培育。根据长蛸的野外巢穴“宽进口窄出口”的构造和长蛸喜打斗的习性改进了之前使用的采卵器。改用套网的方法封住采卵器的一端，将即将产卵的亲体分离，减少其争斗，有效的提高了收集受精卵的数量，为改进前的2.71倍。
　　采用光滑河蓝蛤和菲律宾蛤仔培养长蛸初孵幼体，分析其生长和存活情况。结果显示:长蛸初孵幼体无外卵黄，体表光滑，第一对腕（最长腕）约为胴长的2.9倍，第1-4对腕平均吸盘数（n=3）分别为66±4.60、55±3.76、43±4.59和41±3.82;1-15d幼体投喂的是蓝蛤(壳长15.4-20.3mm)，之后投喂菲律宾蛤仔(壳长33.2-39.3mm);幼体30d-70d总成活率由80.99％降至54.65％;整个培育过程中，幼体生长率与饵料效率呈极显著线性回归关系(P＜0.01)，y=1.452x-2.731(R2=0.865);1-80d胴长/全长比增幅高于腕长/全长，表明胴体增长快于腕的增长;各腕吸盘数变化不显著;幼体鲜重与培养天数呈指数函数关系，Wt=0.301e0.010t(R2=0.854，P＜0.01);幼体最终生长率122.05％，平均生长率9.97％/旬。

目录

声明

摘要

第一章 文献综述

第一节 头足类养殖技术现状

1．1 头足类简介

1．2 头足类养殖现状

第二节 头足类饵料

2．1 头足类的天然饵料

2．2 头足类人工配合饵料进展

第三节 长蛸研究进展

3．1 长蛸分类地位

3．2 长蛸研究进展

第四节 立论依据和研究意义

第二章 长蛸性成熟期饵料分子学鉴定

0 前言

1 材料和方法

1．1 样品采集

1．2 数据分析

1．3 组织学观察

1．4 DNA的提取与扩增

2 结果

2．1 性成熟和性腺指数

2．2 长蛸成体体重变化

2．3 长蛸摄食强度

2．4 消化腺重Wdg和体重TWt的关系

2．5 饵料组成种类的分子鉴定

3 讨论

3．1 长蛸性成熟与摄食强度关系

3．2 饵料组成

3．3 种内互残现象

第三章 长蛸多雄交配繁殖策略研究干

0 引言

1 材料和方法

1．1 样品采集

1．2 DNA的提取与扩增

1．3 数据分析

2 结果

3 讨论

第四章 长蛸孵化与幼体培育

第一节 长蛸受精卵采集与孵化

0 前言

1 材料与方法

2 讨论

3 小结

第二节 长蛸初孵幼体培育与生长研究‘

0 引言

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

参考文献

硕士期间的学术成果

致谢