以桂枝茯苓丸方药探讨含挥发性成分复方用“半仿生提取法”研究的模式

摘要

目的：以桂枝茯苓丸方药为研究对象，采用多指标成分综合评价的方法，进一步探讨含挥发性成分的中药复方药效物质用“半仿生提取法（SBE法）”研究的基本思路与模式。 方法：首先对桂枝茯苓丸方药进行文献综述和饮片质量鉴定研究。提取工艺研究时，先将方中含挥发性成分的中药（桂枝、牡丹皮、赤芍、桃仁）用超临界流体萃取，以均匀设计U7（74）表布点实验，桂皮醛、肉桂酸、丹皮酚、总萃取物为指标，综合评判，优选出方药超临界CO2萃取（SFE-CO2）的较佳工艺条件；再将超临界萃取后的药渣与方中剩余的茯苓混合，用SBE法提取，以U9（91×33）表布点实验，芍药苷、肉桂酸、苦杏仁苷、茯苓酸、总多糖、干浸膏为指标，综合评判，优选出SBE法较佳工艺条件。在优选出该方药SFE-CO2法和SBE法较佳提取工艺的基础上，用比例分割法优选SBE液和WE液（水提液）较佳醇沉浓度，以及该方药醇（AE）提的较佳浓度；在此基础上，对SBE法、WE法、SBAE法（半仿生提取醇沉法）、WAE法（水提醇沉法）、AE法（醇提法）的5种提取液进行了多指标成分、HPLC指纹图谱比较。 因为化学等值不一定生物等效。又对5种提取液作活血化瘀、抗实验性痛经、抗炎、增强免疫和改善大鼠乳腺增生作用的主要药效学及急性毒性比较。同时对5种含药血清进行了HPLC指纹图谱和对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌活动影响作用的比较研究。最后综合评判，优选出桂枝茯苓丸方药的较佳提取工艺条件。 在提取工艺研究的基础上，进行了桂枝茯苓丸的剂型改革研究，确定了桂枝茯苓软胶囊的制备工艺，制定了质量标准（草案）。 结果：（1）优选出的桂枝茯苓丸方药中含挥发性成分的中药超临界流体萃取的工艺条件为：萃取压力30MPa、萃取温度36℃、分离温度32℃、萃取时间3．5h。（2）优选出桂枝茯苓丸方药的SBE法工艺条件为：3煎用水pH依次为5．0、7．5、8．0；提取时间依次为2．0h、1．5h、1．5h。（3）SBE液醇沉较佳浓度为60%。（4）WE液醇沉较佳浓度为70%。（5）醇提较佳浓度为70%。（6）5种方法提取液（SBE、SBAE、WE、WAE、AE）指标成分的综合评判值顺序为：YSBE>YAE>YWE> YSBAE> YWAE。（7）5种方法提取液指纹图谱相对应的特征峰总面积以SBE液最大。（8）5种方法提取液血清指纹图谱以SBE液含药血清色谱峰特征峰总面积最大，共有峰重叠率最高。（9）5种方法提取液主要药效学综合评价结果以SBE液最佳，最大耐受量试验动物无一死亡。（10）5种方法提取液及含药血清对大鼠离体子宫平滑肌活动试验表明，SBE液及其含药血清综合评价值最大。（11）确定了桂枝茯苓软胶囊的最佳成型工艺，制订了桂枝茯苓软胶囊的质量标准，以方便有效地控制其内在质量。 结论：桂枝茯苓丸方药提取，以先将含挥发性成分的中药（桂枝、牡丹皮、赤芍、桃仁）用SFE-CO2萃取，其药渣与方中剩余的茯苓混合，再用SBE法提取为佳。SBE法提取液及其含药血清与其他提取方法（WE法、SBAE法、WAE法、AE法）作相应比较，药效物质含量高，药理作用强。本研究再一次验证了灰思维方式指导下的SBE法研究设计是科学、合理和先进的，丰富和完善了“用灰思维方式建立中药半仿生提取法”的基本研究模式，拓展了中药研究开发的思路，并为其他含挥发性成分中药复方药效物质的提取及二次开发提供了有益的借鉴，也为快速提高中药现代化水平探索了一条新途径。

目录

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引 言

第一章 文献综述

1桂枝茯苓丸方的处方渊源及方解

1.1处方渊源

1.2方解

2桂枝茯苓丸方药的研究概况

2.1桂枝茯苓丸方药的药理研究概况

2.2桂枝茯苓丸方药的临床应用概况

2.3方中单味药的研究概况

3中药现代化与中药药效物质提取的现状

3.1中药现代化的发展简况

3.2中药药效物质提取的现状

4半仿生提取法的创立和发展研究现状

4.1灰思维方式与中药“半仿生提取法”的创立

4.2“半仿生提取法”的特点

4.3半仿生提取法的适用范围、研究现状及科学意义

5超临界流体萃取技术及其在中医药研究中的应用

5.1超临界CO2萃取技术的特点

5.2影响超临界流体萃取的主要因素

5.3超临界CO2萃取技术在中医药研究中的应用

6中药血清药理学研究概况

6.1中药血清药理学的起源

6.2中药血清药理学的优势

6.3中药血清药理学的研究进展

6.4血清药理学存在的问题与发展前景

7指纹图谱及其在中药物质基础研究中的应用

7.1中药指纹图谱的概念

7.2中药指纹图谱的特点

7.3建立中药指纹图谱的原则

7.4中药指纹图谱的分类

7.5构建中药指纹图谱模式的研究

7.6指纹图谱在中药物质基础研究中的应用

7.7指纹图谱的发展前景

8本课题研究的目的及意义

8.1研究目的

8.2研究意义

第二章 桂枝茯苓丸方饮片量鉴定研究

1仪器与材料

2方法与结果

2.1桂枝质量鉴定研究

2.2茯苓质量鉴定研究

2.3牡丹皮质量鉴定研究

2.4赤芍质量鉴定研究

2.5桃仁质量鉴定研究

3小结与讨论

第三章 桂枝茯苓丸方药超临界流体萃取工艺条件的优选

1仪器与材料

2方法与结果

2.1超临界CO2萃取条件的选择

2.2供试品溶液的制备

2.3肉桂酸、桂皮醛及丹皮酚的含量测定

3实验结果的处理

4验证性实验

5小结与讨论

第四章 均匀设计法优选桂枝茯苓丸方药的半仿生提取工艺条件

1仪器与材料

2方法与结果

2.1实验设计

2.2样品液的制备

2.3供试液的制备

2.4芍药苷含量测定

2.5肉桂酸含量测定

2.6苦杏仁苷含量测定

2.7茯苓酸含量测定

2.8总多糖的含量测定

2.9干浸膏的测定

3实验结果的处理

3.1优化处理

3.2验证性实验

4小结与讨论

第五章 桂枝茯苓丸方药SBE液最佳醇沉浓度的优选

1仪器与材料

2实验方法与结果

2.1样品液的制备

2.2供试液的制备

2.3指标成分测定与处理

3小结与讨论

第六章 桂枝茯苓丸方药水提液最佳醇沉浓度的优选

1仪器与材料

2实验方法与结果

2.1样品液的制备

2.2供试液的制备

2.3指标成分测定与处理

3小结与讨论

第七章 桂枝茯苓丸方药醇提最佳浓度的优选

1仪器与材料

2实验方法与结果

2.1样品液的制备

2.2供试液的制备

2.3指标成分测定与处理

3小结与讨论

第八章 桂枝茯苓丸方药5种方法提取液的指标成分比较

1仪器与材料

2方法与结果

2.1样品溶液的制备

2.2供试液的制备

2.3 5种方法提取液芍药苷的含量测定

2.4 5种方法提取液肉桂酸的含量测定

2.5 5种方法提取液苦杏仁苷的含量测定

2.6 5种方法提取液茯苓酸的含量测定

2.7 5种方法提取液总多糖含量测定

2.8干浸膏得率的测定

2.9 5种方法提取液指标成分的综合评价

2.10 5种方法在单体成分提取方面优劣的初步探讨

3小结与讨论

第九章 桂枝茯苓丸方药5种方法提取液的指纹图谱比较

1仪器与材料

2方法与结果

2.1样品液的制备

2.2供试液的制备

2.3对照液的制备

2.4色谱条件

2.5图谱采集时间的确定

2.6内参照峰的确定

2.7精密度、稳定性考察及SBE特征峰的选择

2.8 5种方法提取液指纹图谱的绘制

2.9共有峰重叠率比较

2.10相似度比较

2.11 9强峰的峰面积差异率及总差异率比较

3小结与讨论

第十章 桂枝茯苓丸方药5种方法提取液血清指纹图谱比较

1仪器与材料

2方法与结果

2.1空白血清供试液的制备

2.2含药血清供试液的制备

2.3色谱条件

2.4采集时间的确定

2.5内参比峰的确定

2.6特征指纹峰的选择及精密度、稳定性考察

2.7采血时间的考察

2.8给药剂量的考察

2.9 5种含药血清指纹图谱的峰数、共有峰的重叠率比较

2.10 5种含药血清指纹图谱相似度的比较

2.11 5种含药血清特征峰面积的差异率比较

3小结与讨论

第十一章 桂枝茯苓丸方药5种方法提取液主要药效学及急性毒性比较研究

1仪器与材料

1.1实验药物

1.2实验试剂

1.3实验动物及饲养环境

1.4实验仪器

2实验方法与结果

2.1不同提取液对血瘀模型大鼠血液流变学的影响

2.2不同提取液对药物诱发痛经模型的影响

2.3不同提取液抗炎作用的实验研究

2.4对机体非特异性免疫功能的影响

2.5不同提取液对乳腺增生大鼠的实验研究

3综合评判

4毒性比较--最大耐受量的测定

5小结与讨论

第十二章桂枝茯苓丸方药不同提取液及含药血清对大鼠离体子宫活动的影响

1仪器与材料

1.1仪器

1.2试剂

1.3动物

1.4供试药液的制备

1.5含药血清的制备

1.6洛氏液配制

2方法与结果

2.1 5种方法提取液对大鼠离体子宫活动的影响

2.2 5种方法提取液含药血清对大鼠离体子宫活动的影响

3综合评判

4小结与讨论

第十三章 桂枝茯苓软胶囊的制备工艺研究

第十四章 桂枝茯苓软胶囊质量标准(草案)及起草说明

结 语

参考文献

附 图

致 谢

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