以慈航丹方药探讨含挥发性成分复方用“半仿生提取法”研究的模式

摘要

目的:以慈航丹方药为例,通过半仿生提取法(SBE法)制备分子量≤1000Da提取物为最终产物,探讨含挥发性成分的中药复方药效物质用“SBE法”研究的基本思路与模式。
　　方法:①首先对慈航丹方药进行基源、性状鉴定与质量鉴定研究;②将方中含挥发性药物(当归、川芎、香附)用超临界流体萃取,以均匀设计U7(75)表发布点试验,在饮片、设备、技术参数相同的基础上作SFE-CO2萃取,萃取物另器保存;以藁苯内酯、盐酸川芎嗪、α-香附酮、总萃取物为指标,综合评判,优选出方药超临界萃取(SFE-CO2)较佳工艺条件;③将超临界萃取后的药渣与方中益母草混合,用半仿生法提取,采用均匀设计U9(91×33)表发布点试验,以盐酸水苏碱、盐酸川芎嗪、阿魏酸、总糖及分子量≤1000Da提取物为指标,综合评判,优选出SBE法制备分子量≤1000Da提取物的条件;④在乙醇浓度30％-80%范围内,采用比例分割法,以上述相同的指标和评判方法,优选出方药醇提制备分子量≤1000Da提取物的较佳醇浓度;⑤以上述相同的指标和评判方法,作方药3种方法(SBE法、WE法、AE法)分子量≤1000Da提取物的多指标成分比较;⑥因化学等值不一定生物等效,故作方药3种方法分子量≤1000Da提取物的活血调经、止痛、抗炎等主要药效及毒性的研究比较;⑦对方药3种方法分子量≤1000Da提取物药液及其兔含药血清作HPLC指纹图谱的研究比较;⑧对方药3种方法分子量≤1000Da提取液的兔含药血清作大鼠离体子宫平滑肌作用的研究比较;⑨最后综合评判分析,优选出慈航丹方药的最佳提取方法和工艺条件。
　　结果:①方中所用的中药皆符合《中国药典》2005版一部各项下规定,均为合格的饮片;②优选出慈航丹方中含挥发性成分的中药超临界流体萃取的工艺条件为:萃取压力30MPa、萃取温度48℃、解析温度Ⅰ60℃、解析温度Ⅱ30℃、萃取时间4.0h。③优选出慈航丹方药的SBE法工艺条件为:3煎用水的pH依次为:6.0、7.5、8.8;提取时间依次为2.0h、1.5h、1.5h。④优选出醇提的最佳浓度为80%;⑤3种方法提取液的综合评判值的顺序为:YSBE＞YAE＞YWE;⑥以SBE液的含药血清HPLC指纹图谱,优选出兔的最佳采血时间为1.5h;给药剂量为7.0g·Kg-1(生药·体重-1);3种方法提取液及其含药血清的HPLC指纹图谱比较研究结果表明,以SBE组色谱中特征峰峰数最多,特征峰总面积最大,共有峰重叠率最高;⑦3种方法提取液的主要药效试验研究结果表明,SBE液的活血调经、止痛、抗炎作用的效果最强;该试验结果与用多指标综合评判的提取工艺优选结果及指纹图谱的比较研究结果相吻合;最大耐受量试验动物无一死亡,3种方法提取液的毒理学研究结果无显著性差异;⑧3种方法提取液含药血清对大鼠离体子宫平滑肌的收缩频率、收缩张力和收缩幅度均有抑制作用;与对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05);与SBE组相比,AE组、WE组亦有显著性差异(P＜0.05),其中SBE液的抑制作用最强;⑨综合评判结果表明,慈航丹方药的3种提取方法中,以SBE法为最佳。
　　结论:慈航丹方药的提取,以先将含挥发性成分的中药用SFE-CO2萃取,其药渣与方中益母草混合,再用SBE法提取,经离心-膜滤法制得分子量≤1000Da提取物,其多指标综合评判效果最佳;SBE法分子量≤1000Da提取液及其含药血清与其他提取方法(AE法、WE法)分子量≤1000Da提取液作相应比较,以SBE法提取液的药效物质含量高,药理作用最强。因此,慈航丹方药以SBE法提取为佳。本研究将化学成分(盐酸水苏碱、盐酸川芎嗪、阿魏酸、总糖)及分子量≤1000Da提取物、主要药效、分子量≤1000Da提取液的指纹图谱及其含药血清指纹图谱有机结合起来,对慈航丹方药进行了SBE法系统的研究,进一步证明了该法研究设计的科学性、合理性,丰富和完善了“用灰思维方式建立中药半仿生提取法”的基本模式。以分子量≤1000Da提取物量为最终产物,能体现中药整体、综合、客观、模糊的特点,为选用现代药物剂型提供了技术支撑,拓展了中药现代化研究的思路与方法。

目录

提要

Abstract

引言

第一章 文献综述

1 中医对月经不调的研究进展

2 慈航丹的方源与方解研究

2.1 方源

2.2 方解

3 中药提取方法的研究进展

3.1 概述

3.2 半仿生提取技术

3.3 超临界流体萃取技术

3.4 存在的问题与展望

4 中药药代动力学的研究进展

4.1 概述

4.2 研究思路

4.3 中药药动学研究方法

4.4 存在的问题与展望

5 血清药理学方法在中药研究中的应用

5.1 概述

5.2 血清药理学研究方法

5.3 存在的问题与展望

6 膜分离技术在中药研究中的应用

6.1 在中药提取方面的应用

6.2 在中药注射液制备方面的应用

6.3 在其他方面的应用

6.4 存在的问题与展望

7 指纹图谱技术在中药研究中的应用

7.1 概述

7.2 指纹图谱技术在中药研究中的应用

7.3 指纹图谱技术在中药复方研究中的应用

7.4 中药指纹图谱的评价方法

7.5 存在的问题与展望

8 课题研究的目的与意义

8.1 研究目的

8.2 研究意义

第二章 慈航丹方药饮片的质量鉴定研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 益母草质量鉴定研究

2.2 川芎质量鉴定研究

2.3 当归质量鉴定研究

2.4 香附质量鉴定研究

3 小结与讨论

第三章 慈航丹方中挥发性药物超临界流体萃取条件优选

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 SFE-CO_2萃取条件的选择

2.2 供试品溶液的制备

2.3 藁苯内酯的含量测定

2.4 盐酸川芎嗪的含量测定

2.5 α-香附酮含量测定

2.6 试验结果的处理

3 验证试验

4 小结与讨论

第四章 SFE-CO_2萃取后药渣与益母草混合用SBE法提取条件优选

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 样品液的制备

2.2 供试液(分子量≤1000Da)的制备

2.3 分子量≤1000Da提取物测定

2.4 盐酸川芎嗪含量测定

2.5 阿魏酸含量测定

2.6 盐酸水苏碱含量测定

2.7 总糖含量测定

2.8 试验结果的处理

3 验证试验

4 小结与讨论

第五章 慈航丹方药醇提最佳乙醇浓度优选

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 样品液的制备

2.2 供试液(分子量≤1000Da)的制备

2.3 各指标的测定与处理

3 验证试验

4 小结与讨论

第六章 慈航丹方药3种方法提取液的成分比较

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 样品液的制备

2.2 供试液(分子量≤1000Da)的制备

2.3 分子量≤1000Da提取物测定

2.4 盐酸川芎嗪含量测定

2.5 阿魏酸含量测定

2.6 盐酸水苏碱含量测定

2.7 总糖含量测定

2.8 试验结果的处理

3 验证试验

4 小结与讨论

第七章 慈航丹方药3种方法提取液的体内、外指纹图谱比较

1 仪器与材料

2 方法与结果

2.1 3种方法提取液HPLC指纹图谱比较

2.2 3种方法提取液含药血清的HPLC指纹图谱比较

2.3 3种方法提取液与其含药血清指纹图谱的比较

3 小结与讨论

第八章 慈航丹方药3种方法提取液主要药效学与毒性比较

1 仪器与材料

1.1 仪器与药品

1.2 试验动物

1.3 供试液(分子量≤1000Da)的制备

2 方法与结果

2.1 对大鼠血清雌二醇(E_2)含量的影响

2.2 对大鼠在体子宫平滑肌的影响

2.3 对药物诱发痛经模型的影响

2.4 对血小板血栓的影响

2.5 对大鼠血小板含量的影响

2.6 对小鼠出血、凝血时间的影响

2.7 抗炎试验

2.8 急性毒性试验(半数致死量、最大耐受量测定)

3 综合评判

4 小结与讨论

第九章 慈航丹方药3种方法提取液的含药血清对离体子宫影响的研究

1 仪器与材料

1.1 仪器与药品

1.2 试验动物

1.3 洛氏液配制

1.4 含药血清的制备

1.5 加入血清量

1.6 离体子宫的获取

2 方法与结果

3 综合评判

4 小结与讨论

结语

参考文献

附图

致谢