经前期综合征肝气郁证模型大鼠不同脑区ERα、ERβ的分布与表达

摘要

目的:检测经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气郁证模型大鼠海马、下丘脑相关区域内ERα和ERβ蛋白分布、表达的变化,初步探讨PMS肝气郁证发病的中枢机制,并研究中药经前舒颗粒对该病证的干预作用。
　　方法:以旷场实验、宏观行为药理学、阴道涂片法筛选合适大鼠进入实验,采用束缚造模法复制PMS肝气郁证大鼠模型,以旷场实验结合宏观行为药理学评价模型,采用免疫组织化学技术ABC法检测正常对照组、PMS肝气郁模型组、模型给药组大鼠海马CA1、CA3、下丘脑腹内侧区(VMH)中ERα和ERβ的定位分布与积分光密度值(IOD),计算IOD(ERβ)/IOD(ERα).
　　结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠体重显著减轻(P＜0.01),旷场实验水平得分、垂直得分、旷场实验总分均显著减少(P＜0.01),大鼠表现出精神萎靡,眼神呆滞,对外界刺激不敏感的状态;而造模并给予经前舒颗粒的大鼠较模型组大鼠体重增长显著(P＜0.05),旷场实验三项得分均显著增加(P＜0.05或P＜0.01)。免疫组化结果显示,三组大鼠海马、下丘脑中ERα和ERβ的定位分布无显著性差异。与正常组大鼠相比,模型组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞出现形态变化,海马CA1、CA3、下丘脑VMH区ERα和ERβIOD显著升高(P＜0.05或P＜0.01),IOD(ERβ)/IOD(ERα)没有显著性差异。造模并给药的大鼠海马结构无异常;与模型组相比,海马CA1、CA3、下丘脑VMH区ERα和ERβIOD显著降低(P＜0.01),下丘脑VMH区IOD(ERβ)/IOD(ERα)显著下降(P＜0.05)。
　　结论:采用束缚造模法可以成功制备PMS肝气郁证大鼠模型,旷场实验结合宏观行为学可有效评价模型。大鼠海马CA1、CA3、下丘脑VMH区ERα、ERβ蛋白表达升高可能与PMS肝气郁证关系密切,可能是PMS肝气郁证发病的中枢机制之一;中药经前舒颗粒可以有效纠正模型大鼠上述脑区ERα、ERβ蛋白表达异常升高的状态,同时下调下丘脑VMH区ERβ/ERα,可能是该药治疗PMS肝气郁证的机制之一。

目录

提要

Abstract

引言

材料与方法

1 材料

1.1 实验动物

1.2 药品与试剂

1.3 仪器及器材

1.4 相关溶液配制

1.5 玻片处理

2 方法

2.1 大鼠模型制备

2.2 大鼠脑组织取材

2.3 石蜡切片制备

2.4 免疫组织化学反应

2.5 检测及数据分析

2.6 统计方法

结果

1 宏观指标结果

1.1 各组大鼠体重比较

1.2 各组大鼠旷场实验行为学得分比较

1.3 大鼠宏观行为药理学观察

2 免疫组化检测结果

2.1 各组大鼠不同脑区ERα、ERβ的定位分布

2.2 各组大鼠海马CA1、CA3区神经元形态的变化

2.3 各组大鼠不同脑区ERα、ERβ免疫阳性细胞积分光密度值(IOD)差异

讨论

1 情志病证与PMS

1.1 情志病证的概述

1.2 典型情志病证PMS概述

1.3 PMS的发病机理

2 PMS肝气郁证模型大鼠的造模及评价

2.1 受试大鼠筛选

2.2 PMS肝气郁证大鼠模型的造模

2.3 体重测量结果分析

2.4 旷场实验和宏观行为药理学结果分析

3 与情绪关系密切的脑区

3.1 海马

3.2 下丘脑

4 雌激素受体及其与抑郁情绪关系

4.1 ER α和ER β的结构

4.2 ER α和ER β在脑内的分布

4.3 ER α与ER β的比值与疾病的关系

4.4 雌激素受体与抑郁情绪的关系

5 问题与展望

5.1 PMS肝气郁证造模方法

5.2 帕佩兹环路对情绪的调节作用

5.3 ERβ-NFkB-5-HT_(1A)R/MAO-A,B/SERT信号转导通路

5.4 经前舒颗粒有效成分对PMS肝气郁证治疗作用的机制

结语

参考文献

综述

参考文献

致谢