淫羊藿苷通过Wnt/β-catenin信号通路对肺纤维化的作用机制研究及相关临床分析

摘要

目的：肺纤维化（pulmonary fibrosis，PF）是间质性肺病发展终末期的病理改变形式，病情进展快，病死率高，但发病机制不明，临床治疗效果不佳。近年来，越来越多的实验研究证实氧化应激在肺纤维化发展过程中发挥着重要作用，细胞氧化、抗氧化失衡是导致肺纤维化形成、进展的关键。相关研究表明，Wnt/β-catenin信号通路在早期肺纤维化发展过程中被异常激活，氧化应激失调，肺成纤维细胞活化增殖，加剧了肺纤维化的进展。为进一步明确补益药淫羊藿对肺纤维化的作用机制，选取淫羊藿苷作用于人胚肺成纤维细胞MRC-5，通过观察Wnt/β-catenin信号通路中相关基因蛋白的前后变化情况，探讨淫羊藿的抗肺纤维化机制，为临床用药提供实验依据。 方法：根据实验要求，以人胚肺成纤维细胞MRC-5作为研究对象，淫羊藿苷为干预药物，将实验分为4组：1.空白组（MRC-5）2.对照组（MRC-5+Wnt1）3.治疗组（MRC-5+Wnt1+淫羊藿苷）4.预保护组（MRC-5+淫羊藿苷+Wnt1）。在成功培养人胚肺成纤维细胞的基础上，通过CKK-8法测定淫羊藿苷最大无毒浓度；细胞生化检测上述4组SOD、CAT活力和MDA、GSH-PX等氧化指标的变化；Western Blotting、QPCR法检测Wnt/β-catenin信号通路中核心蛋白β-catenin及下游蛋白TCF/LEF、cyclinDl、fibronectin、MMP-7的表达；免疫荧光法检测胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ的表达。 成果：淫羊藿苷干预MRC-5后，可显著提高SOD、CAT、GSH-PX浓度，降低MDA浓度，有效提高了细胞的抗氧化水平，且淫羊藿苷预保护用药效果优于治疗用药；同时淫羊藿苷干预后可显著减少细胞核内β-catenin的聚集，除通过Real time PCR、Western Blot法检测到治疗用药不能降低TCF的表达外，其余实验检测均证实下游基因TCF、LEF、cyclinDl、fibronectin、MMP-7表达呈下降趋势，同时可有效抑制胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ的增殖，说明淫羊藿苷干预后可有效抑制Wnt/β-catenin信号通路活性，抑制成纤维细胞活化、胶原蛋白增殖，且淫羊藿苷预保护用药效果优于治疗用药。 结论：淫羊藿苷能够提高人胚肺成纤维细胞MRC-5的抗氧化能力，通过抑制Wnt/β-catenin信号通路活性，可有效抑制MRC-5的活化，进而使肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化减少，以控制肺纤维化的进展。通过实验对比，预保护用药优于治疗用药，为临床淫羊藿预防和治疗肺纤维提供了坚实的实验理论依据。

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